客戶采用MagTransPoly進行磁轉(zhuǎn)染實驗——論文通訊
重慶醫(yī)科大學免疫學研究中心基礎(chǔ)醫(yī)學院免疫學教研室發(fā)表磁轉(zhuǎn)染相關(guān)論文如下：
陳全，劉佳霖，賀靜榮，范曉霞，吳蕊鑫. 磁性納米粒介導沉默PI3Kγ基因調(diào)控腫瘤相關(guān)巨噬細胞抗小鼠肺癌細胞效應的研究, 中國細胞生物學學報, 2020年02期
摘要：為了探討超順磁性Fe3O4納米粒子（superparamagnetic iron oxide nanoparticles,SPIONs）介導的磷脂酰肌醇3激酶γ（phosphatidylinositol 3 kinase γ,PI3Kγ）抑制表達調(diào)控的腫瘤相關(guān)巨噬細胞（tumor-associated macrophages,TAM）對小鼠Lewis肺癌細胞（Lewis lung carcinoma,LLC）增殖和凋亡的影響,該研究構(gòu)建了能啟動巨噬細胞（macrophage,MФ）特異性表達PI3Kγ催化亞基p100 siRNA的pSilencer-EGFP-SP-p110質(zhì)粒,通過SPIONs負載成磁性納米質(zhì)粒復合物（SPIONs-DNA）,在強磁作用下轉(zhuǎn)染MФ,通過普魯士藍染色法檢測SPIONs-DNA在細胞內(nèi)的分布,Real-time PCR和Western blot檢測細胞PI3Kγ p110亞基的表達水平。建立M1、M2型MФ模型,將SPIONs-DNA在強磁作用下轉(zhuǎn)染M2型MФ,通過Real-time PCR和Western blot鑒定細胞表型,明確M2型MФ轉(zhuǎn)化為M1型的強度。采用Transwell系統(tǒng)建立SPIONs-DNA轉(zhuǎn)染的M2型MФ與小鼠LLC細胞的共培養(yǎng)模型,通過錐蟲藍染色法檢測LLC細胞的活細胞數(shù)并繪制細胞生長曲線,CCK-8法檢測LLC細胞增殖情況,硝酸還原酶法檢測共培養(yǎng)液上清中NO含量,流式細胞術(shù)檢測LLC細胞凋亡情況。結(jié)果顯示,制備的SPIONs-DNA在強磁作用下成功轉(zhuǎn)染MФ并大量分布在細胞胞核周圍,SPIONs-DNA轉(zhuǎn)染組細胞PI3Kγ p110 mRNA和蛋白表達水平顯著低于空白細胞對照組（P<0.05）。建立的M1型MФ高表達iNOS（P<0.001）,M2型MФ高表達ARG-1（P<0.001）。M2型MФ轉(zhuǎn)染SPIONs-DNA后細胞iNOS mRNA和蛋白的表達顯著增加（P<0.001）,ARG-1 mRNA和蛋白的表達顯著降低（P<0.01）。在共培養(yǎng)組中,SPIONs-DNA轉(zhuǎn)染的M2型MФ組能大量分泌NO,LLC細胞生長和增殖能力顯著降低（P<0.05）,凋亡率顯著增高（P<0.01）。結(jié)果表明,磁性納米粒負載pSilencer-EGFP-SP-p110重組質(zhì)粒能夠特異性靶向抑制巨噬細胞PI3Kγ p110的表達,誘導M2型MФ轉(zhuǎn)化為M1型;其轉(zhuǎn)染的M2型MФ可顯著抑制LLC細胞的生長和增值,促進細胞凋亡,這與其大量分泌NO有關(guān)。該磁性納米質(zhì)粒復合物可誘導TAM發(fā)揮抗腫瘤作用,為研究開發(fā)有效的抗肺癌基因治療措施奠定基礎(chǔ)。
關(guān)鍵詞：巨噬細胞; PI3Kγ; 超順磁性Fe3O4納米粒子; Lewis肺癌; 增殖; 凋亡;
分類號：R735.2
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