固相增強樣品制備技術(shù)凈化蛋白質(zhì)組樣本（SP3）
技術(shù)簡介
在蛋白質(zhì)組學中，高效分離蛋白質(zhì)與小分子（如鹽離子、去污劑、有機小分子等）是確保質(zhì)譜分析靈敏度和準確性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。尤其在疾病標志物發(fā)現(xiàn)、藥物開發(fā)及臨床樣本分析中具有重要應(yīng)用。傳統(tǒng)方法如甲醇-氯仿或丙酮沉淀依賴反復(fù)離心與干燥，易導致蛋白質(zhì)聚集或低豐度組分丟失，且對強變性劑（如SDS）兼容性差；而過濾輔助樣品制備（FASP）雖能去除小分子干擾，卻因超濾膜吸附效應(yīng)造成高分子量蛋白損失，步驟繁瑣且難以處理微量樣本。
固相增強樣品制備技術(shù)（single-pot, solid-phase-enhanced sample-preparation，SP3）[1]，通過磁珠表面動態(tài)親水作用直接捕獲蛋白質(zhì)，在單管內(nèi)即可完成雜質(zhì)清除、蛋白富集與酶解消化，避免了傳統(tǒng)多步驟分離流程，極大提升了實驗通量和重復(fù)性。這一技術(shù)不僅解決了傳統(tǒng)方法的局限性，更推動了蛋白質(zhì)組學前沿領(lǐng)域的發(fā)展，是現(xiàn)代蛋白質(zhì)組學標準化流程的核心工具之一。廈門普睿邁格生物推出自主研發(fā)的SP3-Carboxyl磁珠試劑盒。本磁珠以聚苯乙烯-納米氧化鐵復(fù)合材質(zhì)為基核，通過創(chuàng)新工藝優(yōu)化親水表面特性（具有親水和疏水表面供選擇），具有接近100%的回收率，耐受1% SDS、6M尿素等強變性體系，適用于細胞、組織、體液等多類型樣本，操作簡便性等優(yōu)勢，提供比同類進口磁珠更高的性價比。（點擊http://www.5000js.com/Product/1736805216.html獲取產(chǎn)品更多詳情）
技術(shù)流程和原理
SP3是一種基于順磁顆粒的蛋白質(zhì)組預(yù)處理工作流程，通過有機溶劑乙醇或乙腈驅(qū)動驅(qū)動蛋白在羧基或其它親水性磁珠表面被捕獲。蛋白質(zhì)通過親水相互作用機制與磁珠結(jié)合，結(jié)合了蛋白的磁珠被束縛在溶劑化層，可沖洗去除不需要的污染物，然后在一定條件下洗脫純化的蛋白質(zhì)。
技術(shù)優(yōu)勢
- 簡單，成本低，僅需磁力架和樣品管，所有步驟都在單管中完成；
- 快速，整個蛋白質(zhì)沉淀、洗滌、除鹽及洗脫步驟，僅需20min；
- 接近100%回收率，無偏回收蛋白質(zhì)；
- 適用體系廣，能夠適合多種緩沖鹽體系，不同物種及不同蛋白量。
參考文獻
Single-pot, solid-phase-enhanced sample preparation for proteomics experiments. Nat. Protoc. 2019, 14, 68-85
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