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PuriMag?Homo-COOH是均勻的，單一化的超順磁性1μm直徑微球，由高度交聯(lián)的聚苯乙烯和均勻分布的磁性材料組成。磁珠進(jìn)一步涂覆有縮水甘油醚的親水層，將氧化鐵隱藏在其中。然后將羧基引入珠子的表面。小的1μm的PuriMag?Homo-COOH具有親水性表面，可確保低特異性結(jié)合，優(yōu)異的分散能力以及易于在各種緩沖液中處理。這些磁珠還具有高磁性遷移率和低沉降率，使其成為自動(dòng)化分析的理想選擇。 PuriMag Homo羧基磁珠以水性懸浮液形式提供。
一旦與您的配體結(jié)合，PuriMag磁珠可以添加到細(xì)胞裂解物或含有您的目標(biāo)分子的其他懸浮液中。在短暫孵育以允許靶標(biāo)的親和捕獲后，通過(guò)使用允許抽吸未結(jié)合材料的磁體將PuriMag磁珠拉到試管的側(cè)面。此外，磁性分離有助于洗滌和濃縮與磁珠結(jié)合的分離的靶標(biāo)。 PuriMag磁珠不抑制酶活性，并且可以直接包含在珠結(jié)合的靶分子的下游分析中?；蛘撸梢杂贸Ｒ?guī)洗脫方法從PuriMag磁珠上洗脫目標(biāo)分子。
二、產(chǎn)品特性
Bead diameter: 1 μm
Active chemical functionality: 600 μmol/g beads
Concentration: 10 mg/ml (7-12 x 109 beads/ml)
Density: 1.8 g/cm3
Coupling Buffer（偶聯(lián)緩沖液）:
50 mM MES [2-(N-morpholino)-ethanesulfonic acid], pH 6.0, 0.01% Triton X-100;
Coupling Agent（偶聯(lián)試劑）:
EDC [1-ethyl-3-(3-dimethyaminopropyl)-carbodiimide]；
Sulfo-NHS [N-hydroxysulfosuccinimide] (Optional)
Quench Buffer（淬滅緩沖液）:
TBS (25 mM Tris-Cl, 130 mM NaCl, 2.7 mM KCl), pH 8, 0.01% Triton X-100;
Storage Buffer（儲(chǔ)存緩沖液）:
TBS or PBS containing 0.01% Triton X-100 or 0.01% Tween 20. Add preservative if needed.
以下方案為配體與100μL的PuriMag Homo -COOH羧基磁珠的偶聯(lián)方案。該方案可按需放大或縮小。強(qiáng)烈建議對(duì)珠子活化（EDC、EDC / NHS和pH）和偶聯(lián)條件（配體濃度、偶聯(lián)緩沖液、pH、反應(yīng)體積和溫育時(shí)間）進(jìn)行優(yōu)化。
注意：
■ 通過(guò)渦旋確保磁珠均勻懸浮。
■ 為獲得最佳性能，在無(wú)胺偶聯(lián)緩沖液中偶聯(lián)，蛋白應(yīng)為0.5?4mg / mL，寡核苷酸為20?100μM，不含其它蛋白。較高濃度的蛋白可靈活地優(yōu)化反應(yīng)體積。含tris、甘氨酸、醋酸鹽或檸檬酸鹽的緩沖液不能使用。
■ 含有0.01％的Triton X-100的50 mM MES緩沖液（pH 6.0）可用作活化和偶聯(lián)緩沖液。當(dāng)使用化學(xué)合成的寡核苷酸時(shí)，寡核苷酸末端應(yīng)有5'-胺基以偶聯(lián)磁珠。
■ 珠子含有0.5％SDS以穩(wěn)定懸浮液。盡管非必須，但在所有緩沖液中包含0.01?0.05％Triton X-100或0.01?0.05％吐溫20將防止珠粒凝結(jié)并改善分散特性。
偶聯(lián)方案A：使用EDC的兩步偶聯(lián)
該方案被推薦用于將蛋白偶聯(lián)到羧基磁珠上。首先使用水溶性碳二亞胺（EDC）活化珠上的羧基以形成胺反應(yīng)性中間體。除去EDC后，加入蛋白質(zhì)配體并通過(guò)蛋白質(zhì)上的伯胺與磁珠的活化羧基偶聯(lián)。
1. 確保蛋白或配體在無(wú)胺偶聯(lián)緩沖液中。100μL偶聯(lián)緩沖液中需50?400μg蛋白用于耦合。放在冰上。
2. 渦旋振蕩重懸PuriMag Homo-COOH羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL EP管中，磁分離并吸棄上清。
3. 加入200μL偶聯(lián)緩沖液，渦旋20秒洗滌磁珠，磁分離并吸棄上清。
4. 按步驟3再次清洗羧基磁珠兩次。
5. 使用前用偶聯(lián)緩沖液中配制EDC（50 mg / mL）。
6. 向磁珠中加入80μL偶聯(lián)緩沖液和20μL新配的EDC溶液，混勻。室溫孵育15分鐘，磁分離并吸棄上清。
7. 用200μL偶聯(lián)緩沖液清洗磁珠，磁分離并吸棄上清。
注意：該步驟應(yīng)該快速進(jìn)行，因?yàn)榇胖樯系陌贩磻?yīng)性中間體不穩(wěn)定。
8. 向羧基磁珠加入100μL偶聯(lián)緩沖液和50?400μg蛋白質(zhì)或配體，渦旋混勻。
9. 室溫下孵育30分鐘。根據(jù)配體和濃度的不同，最佳孵育時(shí)間可能為0.5?4小時(shí)。
10. 將試管放入磁力架中，磁分離并吸棄上清。該上清液含有未結(jié)合的配體，如果優(yōu)化方案可保存用于分析。
11. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。渦旋20秒，磁分離并吸棄上清。
12. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。室溫孵育30?60分鐘。磁分離并吸棄上清。
13. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。劇烈漩渦20秒，磁分離并吸棄上清。按該步驟再洗兩次磁珠。
14. 從磁力架上取下EP管。添加100μL存儲(chǔ)緩沖液。渦旋混合并在2?8°C儲(chǔ)存偶聯(lián)好的磁珠。
偶聯(lián)方案B：用sulfo-NHS替代兩步偶聯(lián)
該方案與上述方案類(lèi)似，但使用NHS?？赏ㄟ^(guò)加入穩(wěn)定胺反應(yīng)性中間體的sulfo-NHS來(lái)增加EDC介導(dǎo)的反應(yīng)的效率。
2. 渦旋振蕩重懸PuriMag Homo-COOH羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL的EP管中，磁分離吸棄上清。
3. 加入200μL偶聯(lián)緩沖液。劇烈漩渦20秒，磁分離并吸棄上清。
4. 按步驟3再清洗羧基磁珠兩次。
5. 使用前用偶聯(lián)緩沖液中配制EDC（50 mg / mL）。在使用前用偶聯(lián)緩沖液配制Sulfo-NHS（50mg / mL）。
6. 向磁珠中加入60μL偶聯(lián)緩沖液、20μL新配的EDC溶液和20μL新配的Sulfo-NHS溶液。渦旋混勻。
7. 室溫下混勻孵育15分鐘。磁分離并吸棄上清。
8. 用200μL偶聯(lián)緩沖液清洗磁珠。渦旋混勻，磁分離并吸棄上清。
9. 加入100μL偶聯(lián)緩沖液和50?400μg蛋白或配體。渦旋混勻。在室溫下連續(xù)混合孵育0.5?4小時(shí)。
10. 將試管放入磁力架中，磁分離并吸棄上清。該上清液含未結(jié)合的配體，如果優(yōu)化方案可保存用于分析。
11. 向羧基磁珠加入250μL淬滅緩沖液。渦旋20秒，磁分離并吸棄上清。
13. 向羧基磁珠加入250μL淬滅緩沖液。劇烈漩渦20秒，磁分離并吸棄上清。
偶聯(lián)方案C：一步偶聯(lián)
這是一個(gè)快速結(jié)合方案，在一個(gè)反應(yīng)中同時(shí)加入羧基磁珠、EDC和配體。該方案最適合偶聯(lián)寡核苷酸和小分子，當(dāng)配體上的羧酸基團(tuán)的激活不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)時(shí)。
1. 確保蛋白或配體在無(wú)胺偶聯(lián)緩沖液中。100μL偶聯(lián)緩沖液中需50?400μg蛋白或1?5nmol寡核苷酸進(jìn)行偶聯(lián)。放在冰上。
5. 從磁力架上取下EP管。在80μL偶聯(lián)緩沖液中加入50?400μg配體。
6. 在室溫下孵育30分鐘。
7. 使用前用偶聯(lián)緩沖液配制EDC（50 mg / mL）。
8. 將20μL新配的EDC溶液加入磁珠中。渦旋混勻，室溫下連續(xù)混合孵育0.5?4小時(shí)。
9. 將試管放入磁力架中，磁分離并吸棄上清。該上清含未結(jié)合的配體，如果優(yōu)化方案可以保存用于分析。
10. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。渦旋20秒，磁分離并吸棄上清。
11. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。室溫孵育30?60分鐘。磁分離并吸棄上清。
12. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。劇烈漩渦20秒，磁分離并吸棄上清。按該步驟再洗兩次磁珠。
部分采用本磁珠文獻(xiàn)
1. Qiuyuan Lin, Zhipeng Huang, Xin Ye, Bin Yang, Xueen Fang, Baohong Liu, Hui Chen, Jilie Kong, Lab in a tube: Isolation, extraction, and isothermal amplification detection of exosomal long noncoding RNA of gastric cancer, Talanta, Volume 225, 2021, 122090, （羧基聚合物磁珠PuriMag Homo-COOH偶聯(lián)抗體）
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