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I. 用途
PuriMag Si-WCX磁珠是涂有弱陽(yáng)離子交換表面（WCX）的磁性硅納米顆粒。磁珠適用于：
● 質(zhì)譜分析（例如MALDI-TOF分析）和HPLC之前的樣品制備和預(yù)分級(jí)
● 用于多種下游應(yīng)用的蛋白質(zhì)和肽分離，例如酶測(cè)定
● 去除洗滌劑
● 臨床樣本的分級(jí)，例如血清，血漿，組織，腦脊液，尿液和細(xì)胞裂解液
PuriMag Si-WCX磁珠可方便用于手動(dòng)和自動(dòng)化工作流程。在外磁場(chǎng)作用下，高磁強(qiáng)度的磁珠通常在1分鐘內(nèi)完全收集。快速和完全分離導(dǎo)致非常好的再現(xiàn)性，因?yàn)樵谙礈觳襟E不會(huì)損失磁珠。此外，與基于柱子的離子交換色譜相比，蛋白質(zhì)吸附、解吸和磁性收集的短暫孵育時(shí)間通常顯著縮短，如HPLC。PuriMag Si-WCX磁珠適用于自動(dòng)液體處理平臺(tái)上的96孔微孔板。
產(chǎn)品名稱
PuriMag Si-WCX
濃度
20mg / ml
平均尺寸
0.4μm（+/-0.04μm）
材料
硅基磁性材料
磁分離
<30 S
儲(chǔ)存
2-8°C軟化水中
II．原理
肽和蛋白質(zhì)與PuriMag Si-WCX磁珠表面上的陰離子基團(tuán)結(jié)合，同時(shí)洗去雜質(zhì)。在解吸緩沖液中洗脫后，純化的肽和蛋白質(zhì)可供下游使用。
● 預(yù)平衡溶液：0.05 M Ammonium Acetate（AmAc）， pH 4，1M NaCl
● 吸附緩沖溶液：0.05 M Ammonium Acetate， pH 4
● 洗滌液：水（HPLC級(jí)）
● MALDI MS的解吸溶液1： 1% TFA水溶液
解吸溶液2： a) 0.05 M AmAc，pH 4，0.2 M NaCl
b) 0.05 M AmAc，pH 4，0.4 M NaCl
c) 0.05 M AmAc，pH 4，0.6 M NaCl
d) 0.05 M AmAc，pH 4，0.8 M NaCl
e) 0.05 M AmAc，pH 4，1 M NaCl
對(duì)于緩沖系統(tǒng)，應(yīng)考慮目標(biāo)分子的pI。為有效吸附和解吸，吸附和解吸緩沖液的pH應(yīng)至少比要結(jié)合的分子的pI低1個(gè)pH單位，但不應(yīng)超過(guò)4個(gè)pH單位。
為分析體液如血清，建議在不同pH下測(cè)試其它緩沖系統(tǒng)，因?yàn)槟繕?biāo)分子的pI是未知的?？蛇x吸附緩沖液：
● 50 mM Sodium citrate, pH 5 (with increasing NaCl concentrations as for the AmAc system)
● 50 mM MES, pH 6
● 50 mM sodium phosphate pH
● 50 mM HEPES pH 8
為了更好地處理，可使用0.01%吐溫20或0.01%TX100的洗滌劑。但請(qǐng)注意，清潔劑可能會(huì)干擾質(zhì)譜等下游應(yīng)用。推薦使用高達(dá)8mM的正辛基葡糖苷（n-octylglucoside）進(jìn)行血清分析。
V. 實(shí)驗(yàn)使用流程
1）反離子預(yù)平衡：渦旋PuriMag Si-WCX磁珠均勻懸浮，將20μl磁珠懸浮液轉(zhuǎn)移至PCR管，磁分離去除上清。從磁鐵上取下管子，加入200μl預(yù)平衡溶液并重新懸浮，磁分離棄上清，重復(fù)洗滌兩次。
2）吸附緩沖液平衡磁珠：向磁珠中加入200μl吸附緩沖液，并重新懸浮磁珠，磁分離棄上清。吸附緩沖液重復(fù)洗滌兩次。
3）蛋白質(zhì)/肽的吸附：向洗滌過(guò)的磁珠中加入含大約10μg蛋白質(zhì)或肽的樣品，吸附溶液總體積200μl。在室溫下輕輕搖動(dòng)磁珠5分鐘完成吸附，磁分離棄上清。加入200μl吸附液，洗滌磁珠，棄去上清液。重復(fù)洗滌三次。
4）解吸：
A）MS分析的解吸：向磁珠中加入100μl洗滌液并重懸（脫鹽步驟），磁分離，棄上清液。向磁珠中加入10μl解吸附溶液1，重新懸浮，磁分離，取出液體至Eppendorf管進(jìn)行進(jìn)一步分析。
MALDI分析：通常，將1μl洗脫液和1μl適當(dāng)MALDI-MS基質(zhì)的飽和溶液混合（typically, alphacyano-4-hydroxy-cinnamic acid is used for peptides 4000 Da, sinapinic acid is used.）。在MALDI靶上點(diǎn)樣1μl混合物產(chǎn)生可靠的光譜。
B） 在天然蛋白質(zhì)條件下的解吸：將磁珠重新懸浮在20μl解吸附溶液2a （0.05M AmAc, pH 4, 0.2 M NaCl）中。并在室溫下孵育2分鐘，磁分離并轉(zhuǎn)移上清液。增加解吸溶液2的鹽濃度b-e，該解析步。
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