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近年來,在生命科學領域,為了進一步解析基因功能,蛋白質(zhì)組學(Proteomics)和多肽組學(peptidomics)研究應運而生。蛋白質(zhì)組學是在蛋白質(zhì)層面討論生命系統(tǒng)之現(xiàn)象,包括特定的細胞、組織、臟器中基因經(jīng)轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生之全部蛋白質(zhì),可為疾病診斷、動植物育種和新藥研發(fā)等領域所應用?;陲w速發(fā)展的質(zhì)譜技術分析蛋白質(zhì),具有高效、快速、簡單等顯著特點,因而成為蛋白組學研究的重要工具。在質(zhì)譜分析前,往往要對樣本進行冗繁的前處理,達到濃縮富集目標蛋白的目的,再進行質(zhì)譜分析。PuriMag磁珠法蛋白冠前處理試劑盒可以替代傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)樣本前處理手段用于蛋白組學樣本前處理,作為快速解決這一問題的重要工具。PuriMag? Promix Kit-001、Promix Kit-002、Promix Kit-003、Promix Kit-004、Promix Kit-005單獨使用可獲得2000-4000個蛋白。
PuriMag? Promix Kit-001
Cat.
Particle Description
Material
Volume (ml)
Zeta potential (mV)
Pmix01001
Silica coated
SiO2
1 ml
-30 ~ -40
Pmix05003
Dimethylamine function
Polymer
20 ~ 30
Pmix05001
Carboxylated polystyrene
-25 ~ -30
Pmix04002
Hydroxyl HIC
-10 ~ -20
Pmix05006
Polyzwitterion coated HILIC
-20 ~ -30
混合使用時:Pmix01001(10μL)+Pmix05003(5μL)+Pmix05001(10μL)+ Pmix04002(5μL)+Pmix05006(10μL)
PuriMag? Promix Kit-002
Pmix09002
MesoSi
Complex
PuriMag? Promix Kit-003
Pmix01002
Amine
10 ~ 20
Pmix01003
Ethylenediamine-N-propyl
Pmix01004
Carboxyl
Pmix01006
Carboxy propyl
-40 ~ -50
混合使用時:Pmix01001(10μL)+Pmix01002(5μL)+ Pmix01003(5μL)+Pmix01004(10μL)+ Pmix01006(10μL)
PuriMag? Promix Kit-004
Pmix04003
Hydrophilic amine
Pmix04004
Hydrophilic carboxyl
混合使用時:Pmix04003(5μL)+Pmix04004(10 μL)+ Pmix01001(10μL)+Pmix01002(5μL)+ Pmix01004(10μL)
PuriMag? Promix Kit-005
Amine modified
Carbonaceous complex
Pmix05004
Sulphate modified
混合使用時:Pmix05003(25 μL)+Pmix05004(25 μL)
緩沖液
0.05% CHAPS 的TE 緩沖液 (10mM Tris, 1mM disodium EDTA, 150mM KCl,pH7.4~8.0)
操作流程
樣品準備
1. 血漿和血清樣本用含0.05% CHAPS 的TE 緩沖液 (10mM Tris, 1mM disodium EDTA, 150mM KCl,pH7.4) 按1:5稀釋。
磁珠準備
2. 磁性納米粒子上下振蕩搖勻,取50μL磁珠磁分離,去上清,加入100μL的TE 緩沖液,超聲分散10 秒 。磁分離,去上清。再加入100μL的TE 緩沖液,超聲分散10 秒分散 。
孵育
3. 為了形成蛋白冠,在上述100 μL 磁性納米粒子懸液中加入 200 μL 稀釋的樣本,于37 °C下300 rpm振蕩孵育1h。(注意:孵育時避免磁珠沉降)
收集磁珠
4. 孵育后,磁分離 5 min ,移去上清液。
洗滌磁珠
5. 用500 μL的TE 緩沖液洗滌磁珠3次,并磁分離去上清。(注意:盡量洗去表面高豐度蛋白)
酶解洗脫
6. 為了水解蛋白冠,采用胰蛋白酶試劑盒 (iST 96×, PreOmics, Germany) 。每孔加入50 μL 裂解緩沖液,并95 °C 攪拌加熱 10 min 。冷卻到室溫后,加入胰蛋白酶消化液,37 °C 振蕩孵育 3 h。加入終止液停止消化。磁分離,將上清液移到新管中。用過濾柱 (styrenedivinylbenzene reversed-phase sμL fonate [SDB-RPS])過濾,使用75 μL 洗脫液洗脫多肽2次,合并洗脫液,用多肽試劑盒定量。
客戶發(fā)表論文:
1. Chang Tan, Geng Qin, Qian-Qian Wang, Kai-Min Li, Yuan-Chen Zhou, Shu-Kun Yao. Comprehensive serum proteomics profiles and potential protein biomarkers for the early detection of advanced adenoma and colorectal cancer, World J Gastrointest Oncol, . 2024 Jul 15;16(7):2971-2987. doi: 10.4251/wjgo.v16.i7.2971.(PuriMag蛋白冠混合磁珠富集血清低豐度蛋白)
2. Yating Wang et al. Proteomic and metabolomic analysis of plasma for pain at different labor stages, Talanta, 2024, 126905, https://doi.org/10.1016/j.talanta.2024.126905 (PuriMag蛋白冠混合磁珠富集血漿低豐度蛋白)
3. 翟描忻. 調(diào)氣通濁針法治療超重/肥胖有效性及蛋白/代謝組學的探索性研究[D].北京中醫(yī)藥大學,2023.DOI:10.26973/d.cnki.gbjzu.2023.000673. (PuriMag蛋白冠混合磁珠富集血清低豐度蛋白)
本試劑盒僅供科研使用!
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