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1. 概述
PuriMagTM G-NHS功能化磁性納米粒子是均一的、聚合物包覆的超順磁納米粒，親水表面確保磁珠在各種緩沖液中具有出色的分散性、低非特異吸附和易操作性，表面涂有高密度NHS（N-羥基琥珀酰亞胺）官能團(tuán)可永久共價(jià)偶聯(lián)含伯胺的配體。表面涂有高密度NHS（N-羥基琥珀酰亞胺）官能團(tuán)。配體中的其他活性基團(tuán)無(wú)需在偶聯(lián)之前進(jìn)行保護(hù)。耦合很快（室溫pH 6.5~9下15~30分鐘，4℃下4小時(shí)）。 PuriMagTM G-NHS磁珠最適合與大蛋白或小肽結(jié)合。
NHS磁珠偶聯(lián)機(jī)理：
2. 產(chǎn)品信息
Product Specifications
Description
Polymer coated Fe3O4 nanoparticles
Particle Size
200 nm
Number of Beads
~1.7×1010 beads/mg
Matrix
Proprietary polymer
Functional group
NHS group
Group density
~300 μmole / g of Beads
Magnetization
60~70 EMU/g
Formulation
10 mg/ml suspension in Acetone
Stability
pH 3.5~10, 4~80 ℃, most organic solvents
Storage
1 year at 2~8 ℃. Do not freeze.
3. 使用方法
注意：1）以下方案是將含胺的配體與PuriMagTM G-NHS活化的磁珠偶聯(lián)的示例。強(qiáng)烈建議進(jìn)行滴定，以優(yōu)化用于每種單獨(dú)應(yīng)用的磁珠量。該方案可以相應(yīng)地按比例放大和縮小。
2）偶聯(lián)緩沖液的離子強(qiáng)度對(duì)于獲得更高的耦合效率至關(guān)重要。
3）偶聯(lián)緩沖液應(yīng)具有最小的離子強(qiáng)度，并且不應(yīng)包含任何氨基（例如Tris），但洗滌或儲(chǔ)存緩沖液可以包含氨基或羧基。
A. 所需材料
1）磁力架（用于手動(dòng)操作）：用于容納12個(gè)單獨(dú)的1.5~2ml離心管；用于容納2個(gè)50 ml離心管或2個(gè)15 ml離心管
2）偶聯(lián)緩沖液：10 mM磷酸鉀、0.15 M NaCl、pH 5.5（注意：pH 6.5~9可用于偶聯(lián)，但是在pH?5.5時(shí)可獲得最高偶聯(lián)效率）；
3）洗滌緩沖液：0.05 M Tris-HCl、0.5 M NaCl、pH 8.0；
4）封閉緩沖液：1 M乙醇胺、pH 9；
B. 蛋白質(zhì)偶聯(lián)
1）稱重并將30 mg磁珠轉(zhuǎn)移到離心管中。
2）將0.5-1 mg蛋白質(zhì)/肽溶解在1ml偶聯(lián)緩沖液中。
注意：NHS激活的磁珠的耦合效率因配體而異。使用者應(yīng)根據(jù)經(jīng)驗(yàn)優(yōu)化配體的濃度。建議蛋白質(zhì)結(jié)合使用0.5~10 mg / ml。對(duì)于小肽，配體的濃度應(yīng)為每毫升至少200μmol配體。
3）將蛋白質(zhì)溶液添加到磁珠中。重懸磁珠，并通過(guò)移液或渦旋混合非常均勻。在室溫下連續(xù)旋轉(zhuǎn)孵育反應(yīng)4~6小時(shí)或過(guò)夜。
4）將試管放在磁力分離器上1-3分鐘。當(dāng)試管保留在分離器上時(shí)，除去上清液。從分離器中取出試管，并用1 ml洗滌緩沖液渦旋懸浮30秒。磁分離，除去上清液。
5）按照步驟4所述，用1 ml洗滌緩沖液（或1 M NaCl）洗滌磁珠3-4次。
6）向PuriMagTM磁珠中添加0.5-1ml封閉緩沖液（珠也可以被PBS，pH7.4、0.1％BSA封閉），在室溫下孵育1小時(shí)或在4°C下孵育過(guò)夜。
7）按照步驟4所述，用1ml冷洗滌緩沖液洗滌磁珠3次。
8）將磁珠重懸于pH 7.4、0.1％BSA和0.1％疊氮化物（w / v）的PBS緩沖液中至所需濃度，并保存在4°C下直至使用。不要凍結(jié)。
（本磁珠僅供科研使用！）
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