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【產(chǎn)品介紹】
磁珠法全血、動(dòng)物組織基因組DNA提取試劑盒是普睿邁格生物科技有限公司最新研制的一款基因組DNA提取試劑盒。本產(chǎn)品采用Lysis Buffer和Proteinase K裂解細(xì)菌細(xì)胞，釋放出基因組DNA，在異丙醇的作用下磁珠選擇性的吸附裂解液中的基因組DNA。通過洗滌液的清洗完全除去磁珠吸附的少量雜質(zhì)。在Elution Buffer的作用下Purimag Beads釋放吸附的基因組DNA，即獲得高質(zhì)量的基因組DNA。從1ml的菌液中可以獲得10~20 μg DNA，OD260/OD280比值一般為1.7~1.9，抽提的DNA可直接用于下游實(shí)驗(yàn)。適用于手工細(xì)菌基因組DNA的提取，可配合各類磁棒式核酸提取儀或自動(dòng)化/半自動(dòng)化工作站。
【特點(diǎn)】
l 耗時(shí)少：細(xì)菌DNA提取周期在50分鐘左右；
l 操作簡便：提取過程無需離心；
l 無毒無害：試劑中不含有氯仿，酚等有毒物質(zhì)；
l 效果穩(wěn)定：OD260/OD280穩(wěn)定在1.7-2.0之間，獲得細(xì)菌基因組DNA的純度更高；
l 自動(dòng)化：可以同時(shí)處理多個(gè)樣品，實(shí)現(xiàn)全血、動(dòng)物組織基因組DNA提取的高通量化和自動(dòng)化。
【保存方法及注意事項(xiàng)】
請將試劑盒中的PuriMag Beads、Proteinase K和RNase A置于2-8℃保存，其余試劑室溫保存，有效期詳見包裝。
l 嚴(yán)禁冰凍、離心。冰凍、離心可能會(huì)對磁珠造成不可逆的損害。
l 磁珠長期放置后會(huì)聚集成團(tuán)，從而使磁珠表面積減小，降低樣品回收得率，使用前一定要渦旋振蕩徹底混勻磁珠（通常需渦旋振蕩20秒）。
【試劑盒組成】
組分
100次
保存
Lysis buffer
40 ml
常溫
Wash Buffer W1A
48ml （使用前加入32ml無水乙醇）
Wash Buffer W2
80%乙醇（用戶自備）
Elution buffer
10 ml
PuriMag bead
2 ml
2-8℃
RNase A
0.4 ml （選配試劑）
蛋白酶K
異丙醇
用戶自備
DNA濃度及純度檢測 ：（1）得到的基因組DNA片段大小與樣品保存時(shí)間、操作過程中剪切力等因素有關(guān)，所得DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測濃度和純度。 （2）DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰，OD260=1相當(dāng)于大約50ng/ul雙鏈DNA，40ng/ul單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7~1.9，如果洗脫時(shí)使用去離子水，比值會(huì)偏低，因?yàn)?/strong>pH和離子會(huì)影響吸光度，并不表示純度低。
【操作步驟】
1. 樣品準(zhǔn)備
A．血液：取50-200 ul全血于1.5ml離心管中（如果使用白細(xì)胞，可2000g離心20分鐘，然后小心收集中間的白細(xì)胞層）。
注意：本試劑盒適用于新鮮或凍存的使用EDTA、ACD或肝素抗凝血管收集的全血。新鮮血液須保存在4℃，且是7天內(nèi)收集的血樣。凍存血樣使用前需重新融化。若純化DNA用于擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)，推薦使用EDTA抗凝血管。
B．組織：取動(dòng)物組織10mg，盡量剪成小塊，充分研磨勻漿。
注意：對不易消化的動(dòng)物組織，可液氮研磨后再消化；對毛發(fā)樣本，可剪除毛發(fā)根部，毛干部分剪成1~5mm長度；如提取羊水細(xì)胞DNA，取10-20ml羊水，13000rpm離心5分鐘，收集細(xì)胞沉淀進(jìn)行消化；如提取精液DNA，取20-200ul精液，于13000rpm離心5分鐘，加入500ul的PBS (137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4, pH 7.4) 緩沖液洗滌2次，收集細(xì)胞沉淀進(jìn)行消化。
2. 加入400 μl的Lysis buffer 和20 μl Proteinase K ，渦旋振蕩混勻，56℃孵育消化1~3h或過夜，期間渦旋振蕩混勻數(shù)次，或孵育過程持續(xù)振蕩，消化效果更好。
注意：肝、心、嚙齒動(dòng)物尾巴、肌肉、大腦、毛囊消化1h；脾虛、肺、腎、耳朵消化2h；皮膚消化3h。樣本消化完成后，如有碎片，12000 rpm 離心1 min 去除殘留雜質(zhì)。如需去除RNA ，加入4 μl RNase A 室溫放置10 min。
3. 取20ul 的PuriMag bead于200ul異丙醇離心管中，加入上述裂解后液體400-600ul，吹打混搖勻后，靜置5min后，磁分離移棄上清；
注意：取用磁珠前請振蕩混勻磁珠懸液。對于口腔拭子和干血斑等基因組DNA 含量少的樣本，建議使用15 μl的磁珠； 對于肌肉組織等基因組DNA 含量中等的樣本，建議使用20 μl的磁珠； 對于鼠的脾臟等基因組DNA 含量高的樣本，建議使用30 μl的磁珠。
4. 向離心管加入800ul 的Wash Buffer W1A，吹打混勻后磁分離移棄上清；
5. 向離心管加入800ul的Wash Buffer W2，充分振蕩混勻后磁分離移棄上清；重復(fù)該步驟一次；將磁珠室溫晾干10min，使殘留乙醇揮發(fā)干凈；
注意：乙醇?xì)埩魰?huì)抑制后續(xù)的酶反應(yīng)，所以晾干時(shí)要確保乙醇揮發(fā)干凈。但也不要干燥太長時(shí)間，以免難以洗脫DNA 。
7. 向離心管中加入100 ul Elution Buffer，充分混勻，置于磁力架上，取上清，即為純化的基因組DNA，并于適當(dāng)條件保存。
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