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一、概述
維生素是維持人體生命活動(dòng)所必需的一類營養(yǎng)物質(zhì)，大多數(shù)由食物供給，屬于人體內(nèi)的一類調(diào)節(jié)物質(zhì)。維生素分為水溶維生素和脂溶維生素。脂溶性維生素是指不溶于水而溶于脂肪類有機(jī)溶劑的維生素，包括例如維生素A、維生素D、維生素E和維生素K，其中維生素D包括例如維生素D2和維生素D3。脂溶性維生素的作用多種多樣，除了直接參與和影響特異性的代謝過程外，它們多半還與細(xì)胞內(nèi)核受體結(jié)合，影響特定基因的表達(dá)。脂溶性維生素在人體生長、代謝、發(fā)育過程中發(fā)揮著重要的作用。
合理的維生素水平對(duì)維持人體健康十分重要，準(zhǔn)確測定人體中脂溶性維生素的含量，可以指導(dǎo)人們科學(xué)合理的補(bǔ)充維生素，預(yù)防疾病，提高生活質(zhì)量，同時(shí)對(duì)脂溶性維生素缺乏或過量的臨床判斷、 治療管理和生理評(píng)估具有輔助診斷的意義。對(duì)于脂溶性維生素的測定是臨床樣品中的一項(xiàng)重要任務(wù)。
VD在肝臟可轉(zhuǎn)化為25羥基維生素D(25OH-VD)，其濃度水平與體內(nèi)的VD直接相關(guān)，因此體內(nèi)25OH-VD2、25OH-VD3可作為檢測VD水平的生物標(biāo)志物。VK是激活凝血因子以及蛋白質(zhì)C和S的必須輔助因子，目前已知主要有K1、K2、K3、K4幾種形式，四烯甲萘醌VK2(MK4)既是VK2的家族成員，也是肝外組織中K1的代謝物。當(dāng)這些脂溶性維生素缺乏或過量時(shí)均會(huì)對(duì)人體造成傷害。
目前，臨床上在測定樣品中的脂溶性維生素時(shí)，由于臨床樣品成分復(fù)雜，不能直接進(jìn)行檢測，需要首先進(jìn)行前處理，使樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)姆蛛x和純化后才有可能進(jìn)入后面的分析程序。現(xiàn)有技術(shù)中采用的脂溶性維生素的前處理方法包括蛋白沉淀(PPT)、液液萃取法(LLE)、固相萃取法(SPE)等。然而，現(xiàn)有技術(shù)中的前處理方法存在著無法實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化和/或無法同時(shí)實(shí)現(xiàn)脂溶性維生素A、D、E、K的有效檢測的缺點(diǎn)。
本試劑盒采用聚合物包覆的PuriMagTM HLB磁珠接觸樣品，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)多種脂溶性維生素的檢測，實(shí)現(xiàn)高的檢測靈敏度，并可進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)包括維生素K在內(nèi)的多種脂溶性維生素的同時(shí)檢測。
二、樣品前處理方法
（1）試劑配制
內(nèi)標(biāo)工作液配制表
化合物
儲(chǔ)備液濃度（μg/mL）
移取體積（μL）
內(nèi)標(biāo)工作液（μg/mL）
維生素A ?d5
100
200
2
25?羥基維生素D2?d6
10
50
0.05
25?羥基維生素D3?d6
0.2
維生素E?d6
1000
300
30
維生素K1?d7
1
0.02
80%甲醇
?
9050
（2）樣品處理流程
步驟1→磁珠的預(yù)處理：上下顛倒磁珠懸浮液，混合均勻后取 200 μL磁懸液（2mg）到1.5mL離心管中，加入200uL甲醇渦旋振蕩30S分散磁珠，磁分離，去除甲醇。加入200 μL純水，磁分離，去除水。
步驟2→樣本的磁固相萃?。喝?00μL內(nèi)標(biāo)工作液和400μL樣本加入上述含磁珠的1.5mL離心管中，渦旋振蕩5min分散磁珠，磁吸60S，去除上清液。
步驟3→淋洗：加入400μL純水，渦旋振蕩60S分散磁珠，磁吸60S，去除上清液。 加入400μL的20%乙腈，渦旋振蕩60S分散磁珠，磁吸60S，去除上清液。
步驟4→洗脫：加入100μL乙腈，渦旋振蕩2min分散磁珠，磁吸60S，取上清液上機(jī)檢測。
本產(chǎn)品僅供科研用途！
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