DNA電泳常見(jiàn)問(wèn)題匯總
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問(wèn)題 |
原因 |
解決辦法 |
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DNA帶模糊 |
DNA降解 |
避免核酸酶污染 |
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電泳緩沖液陳舊
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電泳緩沖液多次使用后，離子強(qiáng)度降低，pH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果。建議經(jīng)常更換電泳緩沖液 |
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所用電泳條件不適 |
電泳時(shí)電壓不應(yīng)超過(guò)20V/cm，溫度＜ 30℃；巨大DNA鏈電泳， 溫度應(yīng)＜ 15℃；核查所用電泳緩沖液是否有足夠的緩沖能力 |
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DNA上樣量過(guò)多 |
減少凝膠中DNA上樣量 |
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DNA樣含鹽過(guò)高 |
電泳前通過(guò)乙醇沉淀去除過(guò)多的鹽 |
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有蛋白污染 |
電泳前酚抽提去除蛋白 |
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DNA變性 |
電泳前勿加熱，用 20mM NaCl緩沖液稀釋DNA |
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不規(guī)則DNA帶遷移 |
對(duì)于λ/Hind III片段cos位點(diǎn)復(fù)性 |
電泳前于 65℃加熱DNA 5分鐘，然后在冰上冷卻5分鐘 |
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電泳條件不合適 |
電泳電壓不超過(guò)20V/cm；溫度＜ 30℃；經(jīng)常更換電泳緩沖液 |
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DNA變性 |
以 20mM NaCl Buffer稀釋DNA，電泳前勿加熱 |
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帶弱或無(wú)DNA帶 |
DNA的上樣量不夠 |
增加DNA的上樣量；聚丙烯酰胺凝膠電泳比瓊脂糖電泳 靈敏度稍高，上樣量可適當(dāng)降低 |
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DNA降解 |
避免DNA的核酸酶污染 |
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DNA走出凝膠 |
縮短電泳時(shí)間，降低電壓，增強(qiáng)凝膠濃度 |
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對(duì)于EB染色的DNA， 所用光源不合適 |
應(yīng)用短波長(zhǎng)（254nm）的紫外光源 |
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DNA帶缺失 |
小DNA帶走出凝膠 |
縮短電泳時(shí)間，降低電壓，增強(qiáng)凝膠濃度 |
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分子大小相近的DNA帶不易分辨 |
增加電泳時(shí)間，核準(zhǔn)正確的凝膠濃度 |
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DNA 變性 |
電泳前請(qǐng)勿高溫加熱DNA鏈，以 20mM NaCl Buffer稀釋DNA |
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DNA鏈巨大 |
常規(guī)凝膠電泳不合適 在脈沖凝膠電泳上分析 |
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