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來源:生物磁珠專家 2021-5-17 21:16:52??????點擊:
適配體連接的磁性納米顆粒和氧化還原邊界芯片的凝血酶的簡便,快速和低成本電泳滴定。

靶標生物標志物(如凝血酶)的適體聯(lián)結(jié)測定法面臨長期運行,性能復雜和儀器昂貴的挑戰(zhàn),無法在資源有限的地區(qū)進行臨床診斷。在此,提出了一種簡便的芯片電泳滴定(ET)模型,用于通過適體連接的磁性納米顆粒(MNP),氧化還原邊界(RB)和辣根過氧化物酶(HRP)進行凝血酶的快速,便攜式和低成本測定。在電泳滴定-氧化還原邊界(ET-RB)模型中,選擇凝血酶為模型生物標志物,可以在15分鐘內(nèi)被MNP-aptamer 1和HRP-aptamer 2捕獲,形成(MNP-aptamer 1的三明治復合物)-凝血酶-(HRP適體2)。在10分鐘內(nèi)完成MNP分離和3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)的顯色反應(yīng)后,基于3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺自由基陽離子(TMB?+)和1-抗壞血酸在ET通道中的反應(yīng),可以在5分鐘內(nèi)完成ET-RB運行。基于ET-RB方法的系統(tǒng)實驗表明,可以形成三明治復合物,并且可以通過ET-RB芯片測定凝血酶含量,證明了所開發(fā)的模型和方法。尤其是,與目前使用的凝血酶測定法相比,ET-RB方法具有簡便,快速(不到30分鐘),成本低,便攜性和可視性明顯的優(yōu)點。此外,開發(fā)的方法具有較高的選擇性,靈敏度(檢測極限為0.04 nM)和穩(wěn)定性(日內(nèi):3.26%,日間:6.07%)以及良好的回收率(尿液:97-102%,血清:94- 103%)。


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