DNA提取經(jīng)典方法之——植物組織DNA提取
一、材料
水稻幼苗或其它禾本科植物，幼嫩葉子。
二、設(shè)備
移液器，冷凍高速離心機，臺式高速離心機，水浴鍋，陶瓷研缽，50ml離心管（有蓋）及5ml和1.5ml離心管，彎成鉤狀的小玻棒。
三、試劑
1、提取緩沖液Ⅰ：100mmol/L Tris?Cl，pH8.0，20mmol/L EDTA，500mmol/L NaCl，1.5% SDS。
2、提取緩沖液Ⅱ：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸鈉，6.0gPVP，240μl巰基乙醇，加水至300ml。
3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇
4、RnaseA母液
5、其它試劑：液氮、異丙醇、TE緩沖液，無水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc。
四、操作步驟
（一）水稻幼苗或其它禾木科植物DNA提取
1.在50ml離心管中加入20ml提取緩沖液Ⅰ，60℃水浴預(yù)熱。
2.水稻幼苗或葉子5-10g，剪碎，在研缽中加液氮磨成粉狀后立即倒入預(yù)熱的離心管中，劇烈搖動混勻，60℃水浴保溫30-60分鐘(時間長，DNA產(chǎn)量高)，不時搖動。
3.加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液，顛倒混勻(需帶手套，防止損傷皮膚)，室溫下靜置5-10分鐘，使水相和有機相分層(必要時可重新混勻)。
4.室溫下5000rpm離心5分鐘。
5.仔細移取上清液至另一50ml離心管，加入1倍體積異丙醇，混勻，室溫下放置片刻即出現(xiàn)絮狀DNA沉淀。
6.在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。用鉤狀玻璃棒撈出DNA絮團，在干凈吸水紙上吸干，轉(zhuǎn)入含TE的離心管中，DNA很快溶解于TE。
7.如DNA不形成絮狀沉淀，則可用5000rpm離心5分鐘，再將沉淀移入TE管中。這樣收集的沉淀，往往難溶解于TE，可在60℃水浴放置15分鐘以上，以幫助溶解。
8.將DNA溶液3000rpm離心5分鐘，上清液倒入干凈的5ml離心管。
9.加入5μl RNaseA(10μg/μl)，37℃ 10分鐘，除去RNA(RNA對DNA的操作、分析一般無影響，可省略該步驟）。
10.加入1/10體積的3mol/L NaAc及2×體積的冰乙醇，混勻，-20℃放置20分鐘左右，DNA形成絮狀沉淀。
11.用玻棒撈出DNA沉淀，70%乙醇漂洗，再在干凈吸水紙上吸干。
12.將DNA重溶解于1ml TE，-20貯存。
13.取2μl DNA樣品在0.7% Agarose膠上電泳，檢測DNA的分子大小。同時取15μl稀釋20倍，測定OD260/OD280，檢測DNA含量及質(zhì)量。
[注意] 5g樣品可保證獲得500μg DNA，足供RFLP、PCR等分析之用。
（二）.從李(蘋果)葉子提取DNA
1.取3-5克嫩葉，液氮磨成粉狀。
2.加入提取緩沖液Ⅱ10ml，再研磨至溶漿狀。10000rpm，10min。
3.去上清液，沉淀加提取液Ⅰ20ml，混勻。65℃，30-60min，常搖動。
4.同本節(jié)（一）中步驟3-13操作。
（三）.Purimag磁珠用于提取DNA
使用Purimag的核酸提取磁珠，可以高效提取植物組織DNA。通常在經(jīng)典方法沉淀DNA步驟之前加入磁珠，即可讓DNA吸附在PuriMag磁珠表面，洗脫后即可得到高純度的DNA。
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