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免疫組化試劑配制之緩沖液

2019-6-11 22:21:20點(diǎn)擊:


做免疫組化實(shí)驗(yàn)時(shí),為保證實(shí)驗(yàn)效果,組織都需要進(jìn)行洗滌,其中離不開緩沖液。下面主要介紹一些緩沖液的配制。


  一、不同PH的MPBS液
  1、0.01M的PBS(PH7.2)液
  NaCl 8g
  Na2HPO4 1.15g
  KH2PO4 0.2g(NaH2PO4)
  加雙蒸水至1000ml
  2、0.02M的TBS(PH8.2)液
  Tris 4.84g
  Nacl 17.5g
  BSA 2.0g
  NaN3 1.0g
  加雙蒸水至1500ml
  在攪拌下加濃HCL至PH8.2,再加雙蒸水至2000ml(BSA-牛血清白蛋白;NaN3-疊氮鈉,為防腐劑)
  3、0.05M的TBS(PH7.4)液
  Tris(三羥甲基胺基甲烷) 12.1g
  Nacl 17.5g
  加雙蒸水至1500ml
  在攪拌下加濃HCL至PH7.4,再加雙蒸水至2000ml
  4、0.05M的TB液(PH7.6)液
  Tris 60.75g
  1N HCL約420ml
  加雙蒸水至1000ml

  配制方法:先以少量雙蒸水(300ml)溶解Tris,加入HCL后,再用1N HCL或1N NaOH將PH值調(diào)至7.6,再加雙蒸水至1000ml。用時(shí)將0.5MTB稀釋10倍,即為0.05MTB液(PH7.6)液


  二、枸櫞酸鹽緩沖液
  1、儲存液
  A.0.1M枸櫞酸溶液:稱取21.01g枸櫞酸(C6H8O7·H20)溶于1000ml蒸餾水中
  B.0.1M枸櫞酸鈉溶液:稱取29.41g枸櫞酸鈉(C6H5Na3O7·2H20)溶于1000ml蒸餾水中
  2、工作液
  取9ml A液和41ml B液加入450ml蒸餾水中,溶液pH值應(yīng)為6.0±0.1
  3、PH3.5枸櫞酸鹽緩沖液
  枸櫞酸2.55g
  枸櫞酸鈉2.35g
  雙蒸水加至100ml
  4、PH6.0枸櫞酸鹽緩沖液
  21.01g枸櫞酸加入蒸餾水1000ml 0.1M枸櫞酸
  29.41g枸櫞酸鈉加入蒸餾水1000ml 0.1M枸櫞酸鈉

  使用時(shí)取0.1M枸櫞酸9ml和0.1M枸櫞酸鈉41ml,再加入蒸餾水450ml,即配成0.01M的枸櫞酸緩沖液(PH6.0±0.1),用于微波修復(fù)抗原


  三、0.05M醋酸緩沖液(PH3.5)
  先配制0.1M的醋酸和醋酸鈉溶液
  0.1M醋酸液:冰醋酸5.75ml,雙蒸水加至1000ml
  0.1M醋酸鈉液:醋酸鈉13.61g,雙蒸水1000ml
  再配制0.1M醋酸緩沖液
  0.1M醋酸210ml和0.1M醋酸鈉790ml混合即可
  用時(shí)將0.1M的醋酸緩沖液稀釋5倍,即為0.05M醋酸緩沖液(PH5.2)
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