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ELISA包被抗體實(shí)驗(yàn)中常用試劑的配制

2019-6-11 21:46:23點(diǎn)擊:



1、抗體或免疫球蛋白稀釋液0.01mol/L pH7.2 PBS
  • 試 劑                                            質(zhì)量/容量
  • NaH2PO4·2H2O                              0.39克
  • Na2HPO4                                        1.27克
  • NaCl                                                0.85克
  • NaN3                                              200mg
  • H2O(蒸餾水)                         至 1000ml
2、ELISA洗液及HRP標(biāo)記抗體稀釋液pH7.4,PBST
  • 試 劑                                                      質(zhì)量/容量
  • NaCl                                                            2.0克
  • KH2PO4                                                     0.2克
  • Na2HPO4·12H2O                                       2.9克
  • KCl                                                              0.2克
  • NaN3                                                          0.2克
  • H2O                                                     至 1000ml
  • 吐溫(Tween)20                                        0.5ml
  • 注:4°C保存?zhèn)溆?
3、包被液(簡稱CB)pH9.6
  • 試 劑                                               質(zhì)量/容量
  • Na2CO3                                             1.59克
  • NaHCO3                                            2.93克
  • NaN3                                                   0.2克
  • H2O                                             至 1000ml
  • 注:密封蓋好,4°C存放備用
4、ELISA底物液(可溶性底物)
  • 試 劑                                                       質(zhì)量/容量
  • 磷酸-檸檬酸緩沖液 pH5.0
  • 0.1mol/L 檸檬酸(21.014克/100ml)              24.3ml
  • 0.2mol/L NaHPO4(28.4克/1000ml)          25.7ml
  • H2O                                                            50ml
  • 注:4°C存放備用
5、DAB底物液(不溶性底物,組化病理等)
  • 試 劑                                                 質(zhì)量/容量
  • 0.05mol/L pH7.6 Tris-HCL
  • Tris                                                       6.05克
  • HCl(36%)                          3.15克(約2.7ml濃HCL)
  • H2O                                                至 1000ml
  • 注:DAB為3′,3′二氧基聯(lián)苯胺,不溶性底物,呈棕紅色
6、DAB溶液配制:(組化及Western blot 顯色)

稱DAB 30mg,用0.05mol/L pH7.6 Trs-HCl緩沖液100ml溶解,如有沉淀,過濾后使用,一般新鮮配制使用;

使用前加入1% H2O2 1ml至1.5ml,H2O2濃度為0.01%,混均后使用。

7、3′,3′,5′,5′,-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)溶液配制

用二甲基甲酰胺(dimethylformamide,DMF)或無水乙醇,將TMB配成1%濃度,4°C保存半年以內(nèi)使用;

使用前,用pH5.0磷酸-檸檬酸底物液9.9ml加入0.1ml(1mg/TMB)1% TMB溶液中,再按每毫升TMB加入30% H2O2 1ul,混勻后立即使用。2N H2SO4終止后,450nm測定OD值。

8、1%離子瓊脂膠配制液

作免疫雙相擴(kuò)散,單相擴(kuò)散及免疫電泳中使用。

0.05U pH8.6 巴比妥鈉-HCL緩沖液。

  • 試 劑                       質(zhì)量/容量
  • 巴比妥鈉                   23.8克
  • 1mol/L HCl               34.5ml
  • H2O                          2150ml
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