鏈霉親和素磁珠（SA magnetic bead）產(chǎn)品性能比較研究
磁性聚合物微球兼具高分子微球特性和磁響應(yīng)性，因此，廣泛應(yīng)用于靶向給藥、生物診斷、催化劑制備、磁成像等領(lǐng)域。目前，大部分的生物分子是通過表面的氨基或者羧基與磁性微球表面的基團(tuán)共價(jià)結(jié)合的方式直接固定化在磁性微球的表面。這種方法不僅復(fù)雜，還會使固定化的生物分子活性受到較大影響，例如抗體可能會失去與抗原的特異性結(jié)合的能力。同時(shí)，會限制磁性微球的應(yīng)用范圍。
生物分子很容易被生物素共價(jià)附著修飾，且被附著的生物分子在活性上上幾乎沒有損失。活化的生物素可以與已知的幾乎所有生物分子偶聯(lián)，包括蛋白質(zhì)，核酸，多糖，脂類等。目前很多市售的生物分子，例如抗體，酶，蛋白質(zhì)，核酸等均被生物素修飾。修飾了生物素的生物分子，可以被固定化鏈霉親和素的磁性微球直接吸附，一個(gè)鏈霉親和素分子能結(jié)合４個(gè)生物素分子，因此可以實(shí)現(xiàn)多級放大效應(yīng)，且鏈霉親和素與生物素之間的親和作用，是目前已知強(qiáng)度最高的非共價(jià)作用，其結(jié)合穩(wěn)定，不受離子強(qiáng)度，酸堿性等不良環(huán)境的影響，同時(shí)方法簡單，應(yīng)用范圍更加廣泛。
鏈霉親和素磁性微球能快速捕捉反應(yīng)液中生物素修飾的分子，在抗體和核酸偶聯(lián)應(yīng)用中具有快速簡單的獨(dú)特優(yōu)勢，是生物診斷中最常用的親和捕獲磁珠。市場上的鏈霉親和素磁珠產(chǎn)品質(zhì)量良莠不齊，不同廠家產(chǎn)品在測定其游離生物素結(jié)合能力時(shí)所采用方法的差異使不同產(chǎn)品難以比較。
本文采用熒光生物素的方法測定了市場主流進(jìn)口鏈霉親和素磁性微球產(chǎn)品結(jié)合游離生物素能力。
磁性微球對生物素親和檢測的機(jī)理如圖所示。
分別取200 μL、400 μL、600 μL、800 μL、1200 μL、1600 μL、2000 μL、3000 μL、4000 μL、6000 μL、8000 μL、10000 μL的SA磁性微球(0.1 mg/mL)加入到2 mL離心管中，磁分離，加入100 μL的50 mM的pH 8的三乙醇胺緩沖液。加入1 mL的1 μM的熒光生物素(BF)溶液，避光，室溫下震蕩30 min。磁分離，取1 mL上清，用熒光分光光度計(jì)測量熒光，其激發(fā)波長為494 nm，發(fā)射波長為520 nm。對生物素吸附量的由公式(1)與公式(2)求得：
BF_b=(1-(sample fl.)/(blank fl.))× BF0 （1）
W=(BFb×1 mL)/(0.1 mg) （2）
式中sample fl.和blank fl.分別為樣品的熒光值和空白對照的熒光值；BF0與BFb分別為初始與磁性微球消耗的熒光生物素的濃度，單位為μM；W為磁性微球對熒光生物素的吸附量，單位pmol/mg。
經(jīng)檢測后結(jié)果，如下圖所示：
由圖可知，PuriMag和Bangs的鏈霉親和素磁珠檢測的結(jié)果明顯高于其它同類產(chǎn)品，其中PuriMag的鏈霉親和素磁珠約是Dynal的5倍，表現(xiàn)優(yōu)異。Sphero、Dynal、Scipac、Cortex的產(chǎn)品性能相近。分析該結(jié)果，其主要原因可能是各家產(chǎn)品表面包覆的鏈霉親和素有顯著差異，此外各家磁珠的尺寸不同，亦會導(dǎo)致這種差異。PuriMag的磁珠為直徑200nm，其比表面積顯著大于直徑1um或2.8um的磁珠。由于尺寸較小，PuriMag的磁珠懸浮性亦明顯由于其它產(chǎn)品。
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