鏈霉親和素（Streptavidin，SA）問答
1.什么是鏈霉親和素（Streptavidin，SA）？
答：鏈霉親和素(streptavidin)是由阿維丁鏈霉菌（Streptomyces avidinii）分泌的一種小分子非糖基化蛋白質(zhì)，與親和素(avidin)有相似生物學(xué)特性。其天然形式為同源四聚體，分子量約60kDa。 SA及其衍生物與生物素的親和力更強(qiáng)，特異性結(jié)合更高。已被廣泛用于生物技術(shù)領(lǐng)域。高性能鏈霉親和素請參考http://www.5000js.com/Product/9056422651.html
2.Streptavidin有何用途？
答：Streptavidin已被廣泛應(yīng)用于酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)、組織工程、免疫組織化學(xué)、時(shí)間分辨免疫熒光技術(shù)（TRFIA）、DNA探針、QPCR、親和色譜填料和SA磁珠、單克隆抗體純化、生物傳感器、等離子檢測、生物納米材料、靶向制藥、生物芯片等生物技術(shù)領(lǐng)域。
3.為什么要用SA技術(shù)更新老舊的二抗ELISA？
答：一、與傳統(tǒng)ELISA相比，鏈霉親和素的ELISA的靈敏度提高了5-20倍，且特異性高。
二、與傳統(tǒng)ELISA相比，使用SA技術(shù)能夠大大減少抗體用量(節(jié)省60％以上)，節(jié)省試驗(yàn)成本。
4.SA是怎樣提高診斷檢測靈敏度的？
答： 天然鏈霉親和素分子可以高度特異性地與四分子生物素結(jié)合，兩者之間的親和力極為強(qiáng)烈。在用于標(biāo)記檢測時(shí)，先將抗體進(jìn)行生物素化，標(biāo)記后的SA與生物素化一抗或者二抗結(jié)合，將反應(yīng)信號進(jìn)行了兩步或者三步放大，大大提高檢測的靈敏度。
5.SA的活性單位代表什么？
答：1mg鏈霉親和素蛋白結(jié)合生物素的微克數(shù)就是鏈霉親和素的活性單位，它代表了SA結(jié)合生物素的能力。
6.SA的親和力含義是什么？
答：SA的親和力就是SA與生物素或者生物素衍生物特異性結(jié)合的能力。
7.SA的活性單位高能代表親和力就好嗎？
答：不能。天然核心SA國際比活為12-15 U，SA118比SA核心結(jié)構(gòu)少9個(gè)氨基酸，因?yàn)槠浞肿有?，比活高達(dá)16-18 U,但其偶聯(lián)效率、親和力、半衰期均不及SA159、SA127等核心結(jié)構(gòu)。
8.結(jié)合穩(wěn)定性SA的優(yōu)勢是什么？
答：結(jié)合穩(wěn)定性SA具有成熟SA的127aa最佳核心結(jié)構(gòu)，SA與生物素結(jié)合半壽期≥12小時(shí)，高偶聯(lián)效率,信號持久穩(wěn)定。
9.SA的親和兼容型含義是什么？
答：野生型SA與生物素結(jié)合后其解離常數(shù)為10-15，很難將SA與生物素分開。SA親和兼容型是將SA分子進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，使得含Strept-Tag的蛋白或者生物素化物質(zhì)，在溫和條件下從SA上洗脫下來，從而達(dá)到分離純化的目的。
10.SA與Avidin的區(qū)別？
答：①鏈霉親和素等電點(diǎn)（pI=6.0）比親和素（pI=10.5）低，再加上不帶任何糖基，鏈霉親和素在應(yīng)用中非特異性結(jié)合遠(yuǎn)比親和素低；
②鏈霉親和素更適合結(jié)合長臂生物素；
③鏈霉親和素對熱的耐受性比親和素強(qiáng)；
④親和素活性在13-15U，鏈霉親和素活性在14-18U。
11.SA如何用作表面被料？
答：將SA包被于固相載體（聚苯乙烯等）表面，依靠蛋白質(zhì)與固相載體表面的疏水作用通過物理吸附結(jié)合。
12.SA磁珠有何用途？
答：SA磁珠是將鏈霉親和素偶聯(lián)到磁性固相基質(zhì)上，主要用于分離純化帶有Strept-Tag的蛋白或生物素化物質(zhì)。較之SA層析介質(zhì)，純化操作更加的方便、快捷。
13.為什么有些SA-HRP產(chǎn)品信號不穩(wěn)定？
答：①不同廠家標(biāo)記的SA-HRP分子，一分子SA上標(biāo)記的HRP數(shù)量不同
②HRP分子較大，可能會影響SA與生物素的結(jié)合
③不同廠家用于標(biāo)記的HRP活性參差不齊
14.SA-熒光蛋白有何用途？
答：SA交聯(lián)上熒光素（TSF系列）或者將SA與熒光蛋白融合表達(dá)（SA融合蛋白系列），在特定波長下，激發(fā)出不同顏色的熒光。利用SA與生物素或者生物素衍生物特異性結(jié)合的特性，可以用于生物素標(biāo)記的抗原、抗體、核酸、蛋白或其它生物素標(biāo)記分子的檢測與定位，并且明顯提高方法的靈敏度與特異性。如，流式細(xì)胞記數(shù)和檢測、臨床影像學(xué)成像等應(yīng)用。
15.SA-熒光素酶有何用途？
答：SA-熒光素酶在加入底物（熒光素）時(shí)，會發(fā)出熒光。熒光素酶標(biāo)體系發(fā)光是通過化學(xué)反應(yīng)自發(fā)光，不需要外界光的激發(fā)，這樣激發(fā)背景值就幾乎沒有，可得到比較好的信噪比。
在醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域與基因工程中可作為重要工具,廣泛用于ELISA(抗原、抗體)、Western Blot實(shí)驗(yàn)、病灶部位的定位與分析、單個(gè)細(xì)胞、轉(zhuǎn)基因生物、動物和人體基因表達(dá)的實(shí)時(shí)、低光成像。
16.什么叫單體SA？
答：單體型鏈霉親和素（mSA）是由野生四聚體鏈霉親和素（Tetramer SA, tSA）分子改造而來。具有SA的127aa最佳核心肽段序列，每分子單體型SA（mSA）結(jié)合1個(gè)生物素分子，親和力2.2 X 10-12/Mole。
17.單體SA與四聚體SA的區(qū)別？
答：四聚體SA是由4條相同的肽鏈組成，一分子鏈霉親和素可以高度特異性地與四分子生物素結(jié)合。單體SA是由1條肽鏈組成，一分子鏈霉親和素可以高度特異性地與一分子生物素結(jié)合。
18.單體SA有何特殊用途和利益？
答：單體SA較之天然的四聚體SA分子量更小，因此更容易透過細(xì)胞膜與靶位點(diǎn)結(jié)合，提高了檢測的靈敏度。
19.什么是“鏈霉親和素標(biāo)簽”（Strept-Tag）？
答：“鏈霉親和素標(biāo)簽”（Strept-Tag）是一段由8個(gè)氨基酸(Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys)構(gòu)成的短序列，可以與SA的生物素結(jié)合位點(diǎn)，特異性的與SA結(jié)合。
20.Strept-Tag的優(yōu)點(diǎn)和用途是什么？
答：將Strept-Tag與重組蛋白質(zhì)融合后，可以采用SA層析介質(zhì)（TSS系列、MSS系列）對重組蛋白進(jìn)行檢測或者分離純化。Strept-Tag與SA的配合使用，大大提高了檢測的靈敏度，蛋白的純度。
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