固相增強(qiáng)樣品制備技術(shù)凈化蛋白質(zhì)組樣本（SP3）
技術(shù)簡(jiǎn)介
在蛋白質(zhì)組學(xué)中，高效分離蛋白質(zhì)與小分子（如鹽離子、去污劑、有機(jī)小分子等）是確保質(zhì)譜分析靈敏度和準(zhǔn)確性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。尤其在疾病標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)、藥物開發(fā)及臨床樣本分析中具有重要應(yīng)用。傳統(tǒng)方法如甲醇-氯仿或丙酮沉淀依賴反復(fù)離心與干燥，易導(dǎo)致蛋白質(zhì)聚集或低豐度組分丟失，且對(duì)強(qiáng)變性劑（如SDS）兼容性差；而過(guò)濾輔助樣品制備（FASP）雖能去除小分子干擾，卻因超濾膜吸附效應(yīng)造成高分子量蛋白損失，步驟繁瑣且難以處理微量樣本。
固相增強(qiáng)樣品制備技術(shù)（single-pot, solid-phase-enhanced sample-preparation，SP3）[1]，通過(guò)磁珠表面動(dòng)態(tài)親水作用直接捕獲蛋白質(zhì)，在單管內(nèi)即可完成雜質(zhì)清除、蛋白富集與酶解消化，避免了傳統(tǒng)多步驟分離流程，極大提升了實(shí)驗(yàn)通量和重復(fù)性。這一技術(shù)不僅解決了傳統(tǒng)方法的局限性，更推動(dòng)了蛋白質(zhì)組學(xué)前沿領(lǐng)域的發(fā)展，是現(xiàn)代蛋白質(zhì)組學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化流程的核心工具之一。廈門普睿邁格生物推出自主研發(fā)的SP3-Carboxyl磁珠試劑盒。本磁珠以聚苯乙烯-納米氧化鐵復(fù)合材質(zhì)為基核，通過(guò)創(chuàng)新工藝優(yōu)化親水表面特性（具有親水和疏水表面供選擇），具有接近100%的回收率，耐受1% SDS、6M尿素等強(qiáng)變性體系，適用于細(xì)胞、組織、體液等多類型樣本，操作簡(jiǎn)便性等優(yōu)勢(shì)，提供比同類進(jìn)口磁珠更高的性價(jià)比。（點(diǎn)擊http://www.5000js.com/Product/1736805216.html獲取產(chǎn)品更多詳情）
技術(shù)流程和原理
SP3是一種基于順磁顆粒的蛋白質(zhì)組預(yù)處理工作流程，通過(guò)有機(jī)溶劑乙醇或乙腈驅(qū)動(dòng)驅(qū)動(dòng)蛋白在羧基或其它親水性磁珠表面被捕獲。蛋白質(zhì)通過(guò)親水相互作用機(jī)制與磁珠結(jié)合，結(jié)合了蛋白的磁珠被束縛在溶劑化層，可沖洗去除不需要的污染物，然后在一定條件下洗脫純化的蛋白質(zhì)。
技術(shù)優(yōu)勢(shì)
- 簡(jiǎn)單，成本低，僅需磁力架和樣品管，所有步驟都在單管中完成；
- 快速，整個(gè)蛋白質(zhì)沉淀、洗滌、除鹽及洗脫步驟，僅需20min；
- 接近100%回收率，無(wú)偏回收蛋白質(zhì)；
- 適用體系廣，能夠適合多種緩沖鹽體系，不同物種及不同蛋白量。
參考文獻(xiàn)
Single-pot, solid-phase-enhanced sample preparation for proteomics experiments. Nat. Protoc. 2019, 14, 68-85
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