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本研究旨在畢赤酵母中表達(dá)雞傳染性法氏囊病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)的VP3蛋白,以重組VP3蛋白作為包被抗原建立IBDV血清抗體免疫磁珠間接ELISA檢測(cè)方法并進(jìn)行初步應(yīng)用。利用畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)獲得約為39 ku的重組VP3蛋白,Western-blotting檢測(cè)表明,重組VP3蛋白具有良好的特異性和反應(yīng)原性。免疫磁珠間接ELISA的最佳反應(yīng)條件:PuriMag G-COOH磁珠和抗原偶聯(lián)的緩沖液是50 mmol/L MES(p H 8.0),偶聯(lián)時(shí)間為3 h,抗原加入量為95μg,抗原與羧基磁珠最大偶聯(lián)量為80μg。待檢血清和酶標(biāo)二抗的稀釋度分別為1∶1 600和1∶4 000,血清孵育時(shí)間為30 min,酶標(biāo)二抗孵育時(shí)間為20 min。在該優(yōu)化條件下,陰性、陽性臨界值判定標(biāo)準(zhǔn)為0.134。特異性試驗(yàn)顯示,對(duì)抗AIV、IBV、MDV、NDV陽性血清檢測(cè)結(jié)果均為陰性。敏感性試驗(yàn)顯示,本試驗(yàn)所建立的檢測(cè)方法敏感性高于商品化IBDV血清抗體檢測(cè)試劑盒。重復(fù)性試驗(yàn)顯示,批內(nèi)和批間重復(fù)試驗(yàn)的最大變異系數(shù)分別為3.8%和5.9%。穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果顯示變異系數(shù)小于7%。用建立的檢測(cè)方法和商品化IBDV血清抗體檢測(cè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)50份血清,結(jié)果顯示兩種檢測(cè)方法的相對(duì)敏感性為94.6%,相對(duì)特異性為92.3%,符合率為94.0%。本試驗(yàn)建立的檢測(cè)方法具有敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、穩(wěn)定性高特點(diǎn),為其應(yīng)用于臨床IBDV血清抗體的檢測(cè)奠定了基礎(chǔ)。