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新冠疫情全球爆發(fā)，為了幫助廣大客戶(hù)更好地利用磁珠從鼻/咽拭子中提取SARS-CoV-2病毒RNA，我們給出如下方案供大家參考優(yōu)化：

1. 取出200 uL含鼻/咽拭子的病毒轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基（VTM），并與100 uL GITC裂解緩沖液合并；

2. 加入20 uL超順磁珠（PMSi400001, PuriMag）+ 270 uL異丙醇，用移液器混合4-6次，等待1分鐘，使RNA與磁珠結(jié)合；

注意：磁珠和異丙醇可以預(yù)混以改善工作流程。

3. 將板放在磁力架上約2分鐘至溶液澄清。

4. 去除上清液；

注意：去除上清液時(shí)，將移液器吸頭放在板的底部，以便可以吸出所有液體。

5. 用150 uL異丙醇洗滌磁珠一次。

注意，清洗是指先將異丙醇添加到板上（同時(shí)放在磁力架上），靜置約30秒鐘，然后再去除異丙醇。

6. 用200 uL 70％乙醇洗滌；

7. 重復(fù)步驟6；

8. 放在磁力架上干燥5分鐘（但不要放置太久，因?yàn)橥耆稍?span>/片狀的珠子很難重懸）；

9. 重懸于20 uL 超純水中，放置1分鐘；

10. 再次放在磁力架上至溶液澄清；

11. 將5 uL上清（含模板RNA）轉(zhuǎn)移到新板中進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和qPCR。

GITC 裂解緩：

GITC 6 M，

Tris HCl pH 7.6-8.0 50 mM，

Sarkosyl 2%，

EDTA 20 mM，

Antifoam 0.1%

病毒轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基（VTM）：

Gibco Hanks 860 mL

10% BSA 100 mL (final conc. 1%)

Amphotericin B 10 mL

Penicillin 10 mL

pH 7.2-7.4

Gibco Hanks Solution：

10×Gibco Hanks balanced Salt Solution 200 mL

MilliQ H₂O 770 mL

0.4% phenol red 5 mL

磁珠

本公司提供RNA提取磁珠 PMSi400001, PuriMag

REFERENCES

Corman, V.M., Landt, O., Kaiser, M., Molenkamp, R., Meijer, A., Chu, D.K., Bleicker, T., Brünink, S., Schneider, J., Schmidt, M.L. and Mulders, D.G., 2020. Detection of 2019 novel coronavirus (2019-nCoV) by real-time RT-PCR. Eurosurveillance, 25(3).