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鏈霉親和素(Streptavidin,SA)問(wèn)答

來(lái)源:生物磁珠專(zhuān)家 2016-7-13 9:09:50??????點(diǎn)擊:



1.什么是鏈霉親和素(Streptavidin,SA)?

答:鏈霉親和素(streptavidin)是由阿維丁鏈霉菌(Streptomyces avidinii)分泌的一種小分子非糖基化蛋白質(zhì),與親和素(avidin)有相似生物學(xué)特性。其天然形式為同源四聚體,分子量約60kDa。 SA及其衍生物與生物素的親和力更強(qiáng),特異性結(jié)合更高。已被廣泛用于生物技術(shù)領(lǐng)域。高性能鏈霉親和素請(qǐng)參考http://www.5000js.com/Product/9056422651.html


2.Streptavidin有何用途?

答:Streptavidin已被廣泛應(yīng)用于酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)、組織工程、免疫組織化學(xué)、時(shí)間分辨免疫熒光技術(shù)(TRFIA)、DNA探針、QPCR、親和色譜填料和SA磁珠、單克隆抗體純化、生物傳感器、等離子檢測(cè)、生物納米材料、靶向制藥、生物芯片等生物技術(shù)領(lǐng)域。


3.為什么要用SA技術(shù)更新老舊的二抗ELISA?

答:一、與傳統(tǒng)ELISA相比,鏈霉親和素的ELISA的靈敏度提高了5-20倍,且特異性高。

二、與傳統(tǒng)ELISA相比,使用SA技術(shù)能夠大大減少抗體用量(節(jié)省60%以上),節(jié)省試驗(yàn)成本。


4.SA是怎樣提高診斷檢測(cè)靈敏度的?

答: 天然鏈霉親和素分子可以高度特異性地與四分子生物素結(jié)合,兩者之間的親和力極為強(qiáng)烈。在用于標(biāo)記檢測(cè)時(shí),先將抗體進(jìn)行生物素化,標(biāo)記后的SA與生物素化一抗或者二抗結(jié)合,將反應(yīng)信號(hào)進(jìn)行了兩步或者三步放大,大大提高檢測(cè)的靈敏度。


5.SA的活性單位代表什么?

答:1mg鏈霉親和素蛋白結(jié)合生物素的微克數(shù)就是鏈霉親和素的活性單位,它代表了SA結(jié)合生物素的能力。


6.SA的親和力含義是什么?

答:SA的親和力就是SA與生物素或者生物素衍生物特異性結(jié)合的能力。


7.SA的活性單位高能代表親和力就好嗎?

答:不能。天然核心SA國(guó)際比活為12-15 U,SA118比SA核心結(jié)構(gòu)少9個(gè)氨基酸,因?yàn)槠浞肿有?,比活高達(dá)16-18 U,但其偶聯(lián)效率、親和力、半衰期均不及SA159、SA127等核心結(jié)構(gòu)。


8.結(jié)合穩(wěn)定性SA的優(yōu)勢(shì)是什么?

答:結(jié)合穩(wěn)定性SA具有成熟SA的127aa最佳核心結(jié)構(gòu),SA與生物素結(jié)合半壽期≥12小時(shí),高偶聯(lián)效率,信號(hào)持久穩(wěn)定。


9.SA的親和兼容型含義是什么?

答:野生型SA與生物素結(jié)合后其解離常數(shù)為10-15,很難將SA與生物素分開(kāi)。SA親和兼容型是將SA分子進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾,使得含Strept-Tag的蛋白或者生物素化物質(zhì),在溫和條件下從SA上洗脫下來(lái),從而達(dá)到分離純化的目的。


10.SA與Avidin的區(qū)別?

答:①鏈霉親和素等電點(diǎn)(pI=6.0)比親和素(pI=10.5)低,再加上不帶任何糖基,鏈霉親和素在應(yīng)用中非特異性結(jié)合遠(yuǎn)比親和素低;

②鏈霉親和素更適合結(jié)合長(zhǎng)臂生物素;

③鏈霉親和素對(duì)熱的耐受性比親和素強(qiáng);

④親和素活性在13-15U,鏈霉親和素活性在14-18U。


11.SA如何用作表面被料?

答:將SA包被于固相載體(聚苯乙烯等)表面,依靠蛋白質(zhì)與固相載體表面的疏水作用通過(guò)物理吸附結(jié)合。


12.SA磁珠有何用途?

答:SA磁珠是將鏈霉親和素偶聯(lián)到磁性固相基質(zhì)上,主要用于分離純化帶有Strept-Tag的蛋白或生物素化物質(zhì)。較之SA層析介質(zhì),純化操作更加的方便、快捷。


13.為什么有些SA-HRP產(chǎn)品信號(hào)不穩(wěn)定?

答:①不同廠(chǎng)家標(biāo)記的SA-HRP分子,一分子SA上標(biāo)記的HRP數(shù)量不同

②HRP分子較大,可能會(huì)影響SA與生物素的結(jié)合

③不同廠(chǎng)家用于標(biāo)記的HRP活性參差不齊


14.SA-熒光蛋白有何用途?

答:SA交聯(lián)上熒光素(TSF系列)或者將SA與熒光蛋白融合表達(dá)(SA融合蛋白系列),在特定波長(zhǎng)下,激發(fā)出不同顏色的熒光。利用SA與生物素或者生物素衍生物特異性結(jié)合的特性,可以用于生物素標(biāo)記的抗原、抗體、核酸、蛋白或其它生物素標(biāo)記分子的檢測(cè)與定位,并且明顯提高方法的靈敏度與特異性。如,流式細(xì)胞記數(shù)和檢測(cè)、臨床影像學(xué)成像等應(yīng)用。


15.SA-熒光素酶有何用途?

答:SA-熒光素酶在加入底物(熒光素)時(shí),會(huì)發(fā)出熒光。熒光素酶標(biāo)體系發(fā)光是通過(guò)化學(xué)反應(yīng)自發(fā)光,不需要外界光的激發(fā),這樣激發(fā)背景值就幾乎沒(méi)有,可得到比較好的信噪比。

在醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域與基因工程中可作為重要工具,廣泛用于ELISA(抗原、抗體)、Western Blot實(shí)驗(yàn)、病灶部位的定位與分析、單個(gè)細(xì)胞、轉(zhuǎn)基因生物、動(dòng)物和人體基因表達(dá)的實(shí)時(shí)、低光成像。


16.什么叫單體SA?

答:?jiǎn)误w型鏈霉親和素(mSA)是由野生四聚體鏈霉親和素(Tetramer SA, tSA)分子改造而來(lái)。具有SA的127aa最佳核心肽段序列,每分子單體型SA(mSA)結(jié)合1個(gè)生物素分子,親和力2.2 X 10-12/Mole。


17.單體SA與四聚體SA的區(qū)別?

答:四聚體SA是由4條相同的肽鏈組成,一分子鏈霉親和素可以高度特異性地與四分子生物素結(jié)合。單體SA是由1條肽鏈組成,一分子鏈霉親和素可以高度特異性地與一分子生物素結(jié)合。


18.單體SA有何特殊用途和利益?

答:?jiǎn)误wSA較之天然的四聚體SA分子量更小,因此更容易透過(guò)細(xì)胞膜與靶位點(diǎn)結(jié)合,提高了檢測(cè)的靈敏度。


19.什么是“鏈霉親和素標(biāo)簽”(Strept-Tag)?

答:“鏈霉親和素標(biāo)簽”(Strept-Tag)是一段由8個(gè)氨基酸(Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys)構(gòu)成的短序列,可以與SA的生物素結(jié)合位點(diǎn),特異性的與SA結(jié)合。


20.Strept-Tag的優(yōu)點(diǎn)和用途是什么?

答:將Strept-Tag與重組蛋白質(zhì)融合后,可以采用SA層析介質(zhì)(TSS系列、MSS系列)對(duì)重組蛋白進(jìn)行檢測(cè)或者分離純化。Strept-Tag與SA的配合使用,大大提高了檢測(cè)的靈敏度,蛋白的純度。


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