預(yù)期用途
PuriMagTM IMAC-Cu（基于磁性微球的固定化金屬離子親和色譜）適用于在進(jìn)行 MALDI-TOF 質(zhì)譜分析之前，從生物樣品富集蛋白質(zhì)和肽段。本試劑盒僅供研究使用，不可用于診斷程序。
產(chǎn)品信息
PuriMagTM IMAC-Cu：10 mg/ml×1ml，存儲(chǔ)于 20%乙醇溶液中。 產(chǎn)品應(yīng)小心儲(chǔ)存和處理，以避免污染。
產(chǎn)品在常溫下運(yùn)輸。我們建議到貨后將試劑盒存放在 2 - 8°C 環(huán)境中。請勿冷凍！
IMAC 緩沖液
Binding buffer (BB): 1 M glycolic acid in 80% acetonitrile (ACN) and 5% trifluoroacetic acid (TFA)；
Washing buffer (WB): 80% ACN, 1% TFA；
Elution buffer A (EBA): 1% NH4OH；
Elution buffer B (EBB): 2,5-Dihydroxybenzoic acid (DHB) 20 mg/mL in 50% ACN, 1% phosphoric acid (PA)。
推薦的生物標(biāo)志物富集程序
通常，我們推薦以下樣品制備方案，但根據(jù)樣品的種類和應(yīng)用，可能需要調(diào)整此方案。為此，可以改變不同的參數(shù)（例如，使用的磁珠量、樣品和結(jié)合溶液的體積）。
樣品與磁珠結(jié)合
1. 將磁珠充分渦旋至少 1 分鐘，以獲得均勻的懸浮液。
這一步驟有助于確保磁珠在溶液中均勻分布，以便后續(xù)與樣品充分接觸和結(jié)合。
2. 用 50μl BB 預(yù)處理 20-40 μl 磁珠。
預(yù)處理可以使磁珠處于適宜的結(jié)合狀態(tài)。
3. 將管子再次放入磁分離器中。在磁分離器的相鄰孔之間來回移動(dòng)管子 10 次。（注意管中磁珠的移動(dòng)。）
這種移動(dòng)有助于磁珠與緩沖液充分作用。
4. 使磁珠在管壁聚集 20 秒。以便后續(xù)去除上清液。
5. 用移液器小心地棄去上清液。去除未與磁珠結(jié)合的多余緩沖液。
6. 重復(fù)步驟 2 - 5 兩次。
進(jìn)一步確保磁珠的預(yù)處理效果。
7. 將磁珠重懸于 20μl BB 中。
8. 加入 5μl 樣品（例如人血清），通過移液器上下吹吸五次小心混合。
確保樣品與磁珠充分接觸。
9. 在室溫下保持 5 分鐘。
給予足夠的時(shí)間讓樣品與磁珠結(jié)合。
10. 將管子放入磁分離器中，等待 20 秒，將磁珠與上清液分離。
11. 用移液器小心地棄去上清液。
結(jié)合到磁珠上的樣品的洗滌
12. 為了洗滌，加入 100μl WB。
13. 將管子再次放入磁分離器中。在磁分離器的相鄰孔之間來回移動(dòng)管子 10 次。（注意管中磁珠的移動(dòng)。）
14. 使磁珠在管壁聚集 20 秒。
15. 用移液器小心地棄去上清液。
16. 重復(fù)步驟 12 - 15 兩次。
多次洗滌以去除未結(jié)合的雜質(zhì)。
結(jié)合到磁珠上的樣品的洗脫
17. 為了洗脫，加入 10μl EB（EBA 或 EBB）并充分混合。
18. 等待 5 分鐘。
19. 使結(jié)合在磁珠上的目標(biāo)物充分洗脫。
20. 將管子放入磁分離器中，等待約 20 秒，將磁珠與管壁上的洗脫液分離。
21. 將含有純化的肽/蛋白質(zhì)的洗脫液轉(zhuǎn)移到新的管子中。
按照下面所述的適當(dāng)?shù)?MALDI - TOF 靶制備方案進(jìn)行，或適當(dāng)儲(chǔ)存您的樣品。
應(yīng)用文獻(xiàn)：
1. Mathias Bruegel, Mathis Planert, Sven Baumann, Almut Focke, Florian Then Bergh, Alexander Leichtle, Uta Ceglarek, Joachim Thiery, Georg Martin Fiedler, Standardized peptidome profiling of human cerebrospinal fluid by magnetic bead separation and matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry, Journal of Proteomics, Volume 72, Issue 4, 2009, Pages 608-615, ttps://doi.org/10.1016/j.jprot.2008.11.018.
2. Pakharukova, N.A., Pastushkova, L.K., Trifonova, O.P. et al. Optimization of serum proteome profiling of healthy humans. Hum Physiol 35, 350–356 (2009). https://doi.org/10.1134/S0362119709030116
3. Peter Findeisen, Diamandula Sismanidis, Martin Riedl, Victor Costina, Michael Neumaier, Preanalytical Impact of Sample Handling on Proteome Profiling Experiments with Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry, Clinical Chemistry, Volume 51, Issue 12, 1 December 2005, Pages 2409–2411, https://doi.org/10.1373/clinchem.2005.054585
4. Ziganshin, R.H., Alexeev, D.G., Arapidi, G.P. et al. Serum proteome profiling for diagnostics of ovarian cancer using ClinProt magnetic technique and MALDI-TOF mass spectrometry. Biochem. Moscow Suppl. Ser. B 2, 335–342 (2008). https://doi.org/10.1134/S1990750808040021
5. Georg Martin Fiedler, Sven Baumann, Alexander Leichtle, Anke Oltmann, Julia Kase, Joachim Thiery, Uta Ceglarek, Standardized Peptidome Profiling of Human Urine by Magnetic Bead Separation and Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry, Clinical Chemistry, Volume 53, Issue 3, 1 March 2007, Pages 421–428, https://doi.org/10.1373/clinchem.2006.077834
6. Yang, J., Zhu, J., He, K., Zhao, L.-Y., Liu, L.-Y., Song, T.-S. and Huang, C. (2015), Proteomic Profiling of Invasive Ductal Carcinoma (IDC) using Magnetic Beads-based Serum Fractionation and MALDI-TOF MS. J. Clin. Lab. Anal., 29: 321-327. https://doi.org/10.1002/jcla.21773
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