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近年來(lái)，在生命科學(xué)領(lǐng)域，為了進(jìn)一步解析基因功能，蛋白質(zhì)組學(xué)（Proteomics）和多肽組學(xué)（peptidomics）研究應(yīng)運(yùn)而生。蛋白質(zhì)組學(xué)是在蛋白質(zhì)層面討論生命系統(tǒng)之現(xiàn)象，包括特定的細(xì)胞、組織、臟器中基因經(jīng)轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生之全部蛋白質(zhì)，可為疾病診斷、動(dòng)植物育種和新藥研發(fā)等領(lǐng)域所應(yīng)用?；陲w速發(fā)展的質(zhì)譜技術(shù)分析蛋白質(zhì)，具有高效、快速、簡(jiǎn)單等顯著特點(diǎn)，因而成為蛋白組學(xué)研究的重要工具。在質(zhì)譜分析前，往往要對(duì)樣本進(jìn)行冗繁的前處理，達(dá)到濃縮富集目標(biāo)蛋白的目的，再進(jìn)行質(zhì)譜分析。
PuriMag磁珠法蛋白冠前處理試劑盒可以替代傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)樣本前處理手段用于蛋白組學(xué)樣本前處理，作為快速解決這一問(wèn)題的重要工具。試劑盒內(nèi)的磁珠表面涂覆不同材料，構(gòu)建具有不同親疏水特性、電荷特性、反應(yīng)特性及混合模式特性的磁性顆粒材料，從而展現(xiàn)對(duì)不同蛋白或多肽的親和、吸附、結(jié)合能力，在磁核表面形成蛋白冠（Corona）實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白的分類(lèi)富集，成為蛋白組學(xué)樣品前處理的強(qiáng)有力工具。
蛋白多肽組學(xué)前處理磁珠，重磅來(lái)襲！
試劑盒組成：
Cat.
Particle Description
Material
Volume
(ml)
Zeta potential
(mV)
Pmix01001
Silica coated
SiO2
1 ml
-30 ~ -40
Pmix05003
Dimethylamine function
Polymer
20 ~ 30
Pmix05001
Carboxylated polystyrene
-25 ~ -30
Pmix04002
Hydroxyl HIC
-10 ~ -20
Pmix05006
Polyzwitterion coated HILIC
-20 ~ -30
稀釋緩沖液：40 ml
0.05% CHAPS 的TE 緩沖液 (10mM Tris, 1mM disodium EDTA, 150mM KCl)
實(shí)驗(yàn)操作流程：
樣品準(zhǔn)備
1. 血漿和血清樣本用含0.05% CHAPS 的TE 緩沖液 (10mM Tris, 1mM disodium EDTA, 150mM KCl) 按1:5稀釋。
磁珠準(zhǔn)備
2. 磁性納米粒子在去離子水中超聲10 min 并渦旋2–3 秒 。
孵育
3. 為了形成蛋白冠，100 μL 磁性納米粒子懸液與 100 μL 稀釋的樣本在96孔板混合，并于37 °C 下300 rpm孵育1h。
收集磁珠
4. 孵育后，磁分離 5 min ，移去上清液。
洗滌磁珠
5. 用200 μL 稀釋緩沖液洗滌磁珠3次，并磁分離去上清。
酶解洗脫
6. 為了水解蛋白冠，采用胰蛋白酶試劑盒 (iST 96×, PreOmics, Germany) 。每孔加入50 μL 裂解緩沖液，并95 °C 攪拌加熱 10 min 。冷卻到室溫后，加入胰蛋白酶消化液，37 °C 振蕩孵育 3 h。加入終止液停止消化。磁分離，將上清液移到新管中。用過(guò)濾柱 (styrenedivinylbenzene reversed-phase sulfonate [SDB-RPS])過(guò)濾，使用75 μL 洗脫液洗脫多肽2次，合并洗脫液，用多肽試劑盒定量。
客戶發(fā)表論文：
1. Chang Tan, Geng Qin, Qian-Qian Wang, Kai-Min Li, Yuan-Chen Zhou, Shu-Kun Yao. Comprehensive serum proteomics profiles and potential protein biomarkers for the early detection of advanced adenoma and colorectal cancer, World J Gastrointest Oncol, . 2024 Jul 15;16(7):2971-2987. doi: 10.4251/wjgo.v16.i7.2971.
2. Yating Wang et al. Proteomic and metabolomic analysis of plasma for pain at different labor stages, Talanta, 2024, 126905, https://doi.org/10.1016/j.talanta.2024.126905
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