近年來，在生命科學(xué)領(lǐng)域，為了進(jìn)一步解析基因功能，蛋白質(zhì)組學(xué)（Proteomics）和多肽組學(xué)（peptidomics）研究應(yīng)運(yùn)而生。蛋白質(zhì)組學(xué)是在蛋白質(zhì)層面討論生命系統(tǒng)之現(xiàn)象，包括特定的細(xì)胞、組織、臟器中基因經(jīng)轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生之全部蛋白質(zhì)，可為疾病診斷、動(dòng)植物育種和新藥研發(fā)等領(lǐng)域所應(yīng)用?；陲w速發(fā)展的質(zhì)譜技術(shù)分析蛋白質(zhì)，具有高效、快速、簡單等顯著特點(diǎn)，因而成為蛋白組學(xué)研究的重要工具。在質(zhì)譜分析前，往往要對樣本進(jìn)行冗繁的前處理，達(dá)到濃縮富集目標(biāo)蛋白的目的，再進(jìn)行質(zhì)譜分析。PuriMag磁珠法蛋白冠前處理試劑盒可以替代傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)樣本前處理手段用于蛋白組學(xué)樣本前處理，作為快速解決這一問題的重要工具。PuriMag? Promix Kit-001、Promix Kit-002、Promix Kit-003、Promix Kit-004、Promix Kit-005單獨(dú)使用可獲得2000-4000個(gè)蛋白。
PuriMag? Promix Kit-001
Cat.
Particle Description
Material
Volume (ml)
Zeta potential (mV)
Pmix01001
Silica coated
SiO2
1 ml
-30 ~ -40
Pmix05003
Dimethylamine function
Polymer
20 ~ 30
Pmix05001
Carboxylated polystyrene
-25 ~ -30
Pmix04002
Hydroxyl HIC
-10 ~ -20
Pmix05006
Polyzwitterion coated HILIC
-20 ~ -30
混合使用時(shí)：Pmix01001(10μL)+Pmix05003(5μL)+Pmix05001(10μL)+ Pmix04002(5μL)+Pmix05006(10μL）
PuriMag? Promix Kit-002
Pmix09002
MesoSi
Complex
PuriMag? Promix Kit-003
Pmix01002
Amine
10 ~ 20
Pmix01003
Ethylenediamine-N-propyl
Pmix01004
Carboxyl
Pmix01006
Carboxy propyl
-40 ~ -50
混合使用時(shí)：Pmix01001(10μL)+Pmix01002(5μL)+ Pmix01003(5μL)+Pmix01004(10μL)+ Pmix01006(10μL)
PuriMag? Promix Kit-004
Pmix04003
Hydrophilic amine
Pmix04004
Hydrophilic carboxyl
混合使用時(shí)：Pmix04003(5μL)+Pmix04004(10 μL)+ Pmix01001(10μL)+Pmix01002(5μL)+ Pmix01004(10μL)
PuriMag? Promix Kit-005
Amine modified
Carbonaceous complex
Pmix05004
Sulphate modified
混合使用時(shí)：Pmix05003(25 μL)+Pmix05004(25 μL)
緩沖液
0.05% CHAPS 的TE 緩沖液 (10mM Tris, 1mM disodium EDTA, 150mM KCl，pH7.4~8.0)
操作流程
樣品準(zhǔn)備
1. 血漿和血清樣本用含0.05% CHAPS 的TE 緩沖液 (10mM Tris, 1mM disodium EDTA, 150mM KCl，pH7.4) 按1:5稀釋。
磁珠準(zhǔn)備
2. 磁性納米粒子上下振蕩搖勻，取50μL磁珠磁分離，去上清，加入100μL的TE 緩沖液，超聲分散10 秒 。磁分離，去上清。再加入100μL的TE 緩沖液，超聲分散10 秒分散 。
孵育
3. 為了形成蛋白冠，在上述100 μL 磁性納米粒子懸液中加入 200 μL 稀釋的樣本，于37 °C下300 rpm振蕩孵育1h。（注意：孵育時(shí)避免磁珠沉降）
收集磁珠
4. 孵育后，磁分離 5 min ，移去上清液。
洗滌磁珠
5. 用500 μL的TE 緩沖液洗滌磁珠3次，并磁分離去上清。（注意：盡量洗去表面高豐度蛋白）
酶解洗脫
6. 為了水解蛋白冠，采用胰蛋白酶試劑盒 (iST 96×, PreOmics, Germany) 。每孔加入50 μL 裂解緩沖液，并95 °C 攪拌加熱 10 min 。冷卻到室溫后，加入胰蛋白酶消化液，37 °C 振蕩孵育 3 h。加入終止液停止消化。磁分離，將上清液移到新管中。用過濾柱 (styrenedivinylbenzene reversed-phase sμL fonate [SDB-RPS])過濾，使用75 μL 洗脫液洗脫多肽2次，合并洗脫液，用多肽試劑盒定量。
客戶發(fā)表論文：
1. Chang Tan, Geng Qin, Qian-Qian Wang, Kai-Min Li, Yuan-Chen Zhou, Shu-Kun Yao. Comprehensive serum proteomics profiles and potential protein biomarkers for the early detection of advanced adenoma and colorectal cancer, World J Gastrointest Oncol, . 2024 Jul 15;16(7):2971-2987. doi: 10.4251/wjgo.v16.i7.2971.（PuriMag蛋白冠混合磁珠富集血清低豐度蛋白）
2. Yating Wang et al. Proteomic and metabolomic analysis of plasma for pain at different labor stages, Talanta, 2024, 126905, https://doi.org/10.1016/j.talanta.2024.126905 （PuriMag蛋白冠混合磁珠富集血漿低豐度蛋白）
3. 翟描忻. 調(diào)氣通濁針法治療超重/肥胖有效性及蛋白/代謝組學(xué)的探索性研究[D].北京中醫(yī)藥大學(xué),2023.DOI:10.26973/d.cnki.gbjzu.2023.000673. （PuriMag蛋白冠混合磁珠富集血清低豐度蛋白）
本試劑盒僅供科研使用！
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