一、概述
羧基磁珠（PuriMag G-COOH）是采用親水的高分子材料GMA與超順磁性材料復(fù)合形成的一種新型功能化磁性納米顆粒，提供永久結(jié)合和固定各種胺基配體。與傳統(tǒng)磁珠相比，PuriMag G-COOH磁珠具有超順磁性、更快的磁響應(yīng)性同時保持微球良好的分散性、極低的非特異性吸附和更高的表面羧基密度等特性，能便捷高效地與多種生物配體（蛋白、多肽、寡聚核苷酸、藥物分子等）進(jìn)行高載量共價偶聯(lián)，具有非常高的目標(biāo)物質(zhì)結(jié)合能力，是醫(yī)學(xué)與分子生物學(xué)研究中重要的載體工具。用EDC活化磁珠表面的羧基，使配體通過伯胺基與羧基磁珠偶聯(lián)，可形成穩(wěn)定的酰胺鍵。 PuriMag G-COOH磁性納米顆粒，適用于各種磁性分離應(yīng)用，包括親和力富集、蛋白質(zhì)純化、免疫沉淀和細(xì)胞分選。本產(chǎn)品可完全替代市場主流羧基磁珠如GE Sera-Mag? Magnetic Beads Carboxyl、Dynabeads? MyOne? Carboxyl、JSR的Carboxyl MS150、FG beads等產(chǎn)品，表現(xiàn)為等同甚至更優(yōu)的效果。
二、產(chǎn)品特性
1. 短鏈羧基磁珠PuriMag GS-COOH
基團(tuán)密度> 600 umoles carboxylic acid/g beads
2. 長鏈羧基磁珠PuriMag GL-COOH
羧基密度> 300 μmoles carboxylic acid/g beads
形態(tài)：超順磁球形
直徑：200nm
儲存：10 mg/mL ，去離子水中 2~8 °C保存，勿凍結(jié)。
常溫運(yùn)輸，正確使用保存期一年。
三、緩沖液
Coupling Buffer（偶聯(lián)緩沖液）:
50 mM MES [2-(N-morpholino)-ethanesulfonic acid], pH 6.0, 0.01% Triton X-100;
Coupling Agent（偶聯(lián)試劑）:
EDC [1-ethyl-3-(3-dimethyaminopropyl)-carbodiimide]；
Sulfo-NHS [N-hydroxysulfosuccinimide] (Optional)
Quench Buffer（淬滅緩沖液）:
TBS (25 mM Tris-Cl, 130 mM NaCl, 2.7 mM KCl), pH 8, 0.01% Triton X-100;
Storage Buffer（儲存緩沖液）:
TBS or PBS containing 0.01% Triton X-100 or 0.01% Tween 20. Add preservative if needed.
四、PuriMag G-COOH的使用
以下方案為配體與100μL的PuriMag G-COOH羧基磁珠的偶聯(lián)方案。該方案可按需放大或縮小。強(qiáng)烈建議對珠子活化（EDC、EDC / NHS和pH）和偶聯(lián)條件（配體濃度、偶聯(lián)緩沖液、pH、反應(yīng)體積和溫育時間）進(jìn)行優(yōu)化。
注意：
■ 通過渦旋確保羧基磁珠均勻懸浮。
■ 為獲得最佳性能，在無胺偶聯(lián)緩沖液中偶聯(lián)，蛋白應(yīng)為0.5?4mg / mL，寡核苷酸為20?100μM，不含其它蛋白。較高濃度的蛋白可靈活地優(yōu)化反應(yīng)體積。含tris、甘氨酸、醋酸鹽或檸檬酸鹽的緩沖液不能使用。
■ 含有0.01％的Triton X-100的50 mM MES緩沖液（pH 6.0）可用作活化和偶聯(lián)緩沖液。當(dāng)使用化學(xué)合成的寡核苷酸時，寡核苷酸末端應(yīng)有5'-胺基以偶聯(lián)羧基磁珠。
■ 珠子含有0.5％SDS以穩(wěn)定懸浮液。盡管非必須，但在所有緩沖液中包含0.01?0.05％Triton X-100或0.01?0.05％吐溫20將防止羧基磁珠凝結(jié)并改善分散特性。
偶聯(lián)方案A：使用EDC的兩步偶聯(lián)
該方案被推薦用于將蛋白偶聯(lián)到羧基磁珠上。首先使用水溶性碳二亞胺（EDC）活化珠上的羧基以形成胺反應(yīng)性中間體。除去EDC后，加入蛋白質(zhì)配體并通過蛋白質(zhì)上的伯胺與磁珠的活化羧基偶聯(lián)。
1. 確保蛋白或配體在無胺偶聯(lián)緩沖液中。100μL偶聯(lián)緩沖液中需50?400μg蛋白用于耦合。放在冰上。
2. 渦旋振蕩重懸PuriMag G-COOH羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL EP管中，磁分離并吸棄上清。
3. 加入200μL偶聯(lián)緩沖液，渦旋20秒洗滌磁珠，磁分離并吸棄上清。
4. 按步驟3再次清洗羧基磁珠兩次。
5. 使用前用偶聯(lián)緩沖液中配制EDC（50 mg / mL）。
6. 向磁珠中加入80μL偶聯(lián)緩沖液和20μL新配的EDC溶液，混勻。室溫孵育15分鐘，磁分離并吸棄上清。
7. 用200μL偶聯(lián)緩沖液清洗磁珠，渦旋混勻，磁分離并吸棄上清。
注意：該步驟應(yīng)該快速進(jìn)行，因為磁珠上的胺反應(yīng)性中間體不穩(wěn)定。
8. 向羧基磁珠加入100μL偶聯(lián)緩沖液和50?400μg蛋白質(zhì)或配體，渦旋混勻。
9. 室溫下孵育30分鐘。根據(jù)配體和濃度的不同，最佳孵育時間可能為0.5?4小時。
10. 將試管放入磁力架中，磁分離并吸棄上清。該上清液含有未結(jié)合的配體，如果優(yōu)化方案可保存用于分析。
11. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。渦旋20秒，磁分離并吸棄上清。
12. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。室溫孵育30?60分鐘。磁分離并吸棄上清。
13. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。劇烈漩渦20秒，磁分離并吸棄上清。按該步驟再洗兩次磁珠。
14. 從磁力架上取下EP管。添加100μL存儲緩沖液。渦旋混合并在2?8°C儲存偶聯(lián)好的磁珠。
偶聯(lián)方案B：用sulfo-NHS替代兩步偶聯(lián)
該方案與上述方案類似，但使用NHS?？赏ㄟ^加入穩(wěn)定胺反應(yīng)性中間體的sulfo-NHS來增加EDC介導(dǎo)的反應(yīng)的效率。
2. 渦旋振蕩重懸PuriMag G-COOH羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL的EP管中，磁分離并吸棄上清。
3. 加入200μL偶聯(lián)緩沖液。劇烈漩渦20秒，磁分離并吸棄上清。
4. 按步驟3再清洗羧基磁珠兩次。
5. 使用前用偶聯(lián)緩沖液中配制EDC（50 mg / mL）。在使用前用偶聯(lián)緩沖液配制Sulfo-NHS（50mg / mL）。
6. 向磁珠中加入60μL偶聯(lián)緩沖液、20μL新配的EDC溶液和20μL新配的Sulfo-NHS溶液。渦旋混勻。
7. 室溫下混勻孵育15分鐘。磁分離并吸棄上清。
8. 用200μL偶聯(lián)緩沖液清洗磁珠。渦旋混勻，磁分離并吸棄上清。
9. 加入100μL偶聯(lián)緩沖液和50?400μg蛋白或配體。渦旋混勻。在室溫下連續(xù)混合孵育0.5?4小時。
10. 將試管放入磁力架中，磁分離并吸棄上清。該上清液含未結(jié)合的配體，如果優(yōu)化方案可保存用于分析。
偶聯(lián)方案C：一步偶聯(lián)
這是一個快速結(jié)合方案，在一個反應(yīng)中同時加入羧基磁珠、EDC和配體。該方案最適合偶聯(lián)寡核苷酸和小分子，當(dāng)配體上的羧酸基團(tuán)的激活不會影響后續(xù)實驗時。
1. 確保蛋白或配體在無胺偶聯(lián)緩沖液中。100μL偶聯(lián)緩沖液中需50?400μg蛋白或1?5nmol寡核苷酸進(jìn)行偶聯(lián)。放在冰上。
5. 從磁力架上取下EP管。在80μL偶聯(lián)緩沖液中加入50?400μg配體。
6. 在室溫下孵育30分鐘。
7. 使用前用偶聯(lián)緩沖液配制EDC（50 mg / mL）。
8. 將20μL新配的EDC溶液加入磁珠中。渦旋混勻，室溫下連續(xù)混合孵育0.5?4小時。
9. 將試管放入磁力架中，磁分離并吸棄上清。該上清含未結(jié)合的配體，如果優(yōu)化方案可以保存用于分析。
10. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。渦旋20秒，磁分離并吸棄上清。
11. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。室溫孵育30?60分鐘。磁分離并吸棄上清。
12. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。劇烈漩渦20秒，磁分離并吸棄上清。按該步驟再洗兩次磁珠。
13. 從磁力架上取下EP管。添加100μL存儲緩沖液。渦旋混合并在2?8°C儲存偶聯(lián)好的磁珠。
更多其它羧基磁珠請參考：
羧基瓊脂糖磁珠 http://www.5000js.com/Product/6397142410.html
羧基二氧化硅磁珠 http://www.5000js.com/Product/3076912849.html
部分采用本磁珠文獻(xiàn)：
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2. 龔如月, 于淑媛, 王書博, 姜艷平, 崔文, 喬薪瑗, 王麗, 周晗, 徐義剛, 李一經(jīng), 唐麗杰. 基于重組 IBDV VP3 蛋白的免疫磁珠間接 ELISA抗體檢測方法的建立及初步應(yīng)用, 中國獸醫(yī)科學(xué), 2019, 49 （ 06) ： 678-686 （羧基磁珠PuriMag G-COOH偶聯(lián)抗原檢測IBDV抗體）
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