一、概述
羧基活化瓊脂糖磁珠（Magarose-COOH）含有羧基官能團(tuán)。配體的胺基通過碳二亞胺（EDC）偶聯(lián)方法與羧基活化瓊脂糖磁珠。在該偶聯(lián)方法中，樹脂的游離羧基與配體的胺基反應(yīng)，在水溶性碳二亞胺如EDC（N-ethyl-N’-(3-dimethylaminopropyl）存在下，在低pH（4-5）形成穩(wěn)定的肽鍵。由于Magarose-COOH磁珠在有機(jī)溶劑中穩(wěn)定，如果需要，可在有機(jī)溶劑中進(jìn)行偶聯(lián)。
二、產(chǎn)品特性
產(chǎn)品名稱
Magarose-COOH
貨號(hào)
PMAG016
磁珠濃度
25% (v/v) in 20% isopropanol
配基密度
~ 60 μmol COOH/ ml磁珠
介質(zhì)
6%交聯(lián)磁性瓊脂糖
粒徑
20-45μm
配體結(jié)合
>20 mg IgG/ml磁珠
保存
常溫運(yùn)輸，2~8℃保存一年
注：磁珠蛋白結(jié)合量與目標(biāo)蛋白特性相關(guān)，此處僅作參考值。
三、使用方法
1. 所需材料
w EDC：soluble carbodiimide as its essential for coupling
NOTE: The concentration of carbodiimide used forcoupling is 10-100 times greater than concentration of the resin active groups. One can start initially with 0.1M and later increase to obtain optimum concentration for coupling.
w Coupling Solution: E.g.: Distilled water with pH adjusted to 4.5-6. Purified 50 % glycerol or dioxane with pH adjusted to 4.5-6
NOTE: Do not use electrodes for measuring pH when using organic solvents as they may damage electrodes. Use pH paper instead. Do not use buffers having amino, phosphate or carboxyl groups as they will compete with ligand for binding to the resin.
w Protein, peptide or other small and large ligands with primary amines groups depending upon what molecule need to be affinity purified. Ligand concentration should be excess of resin active groups.
w Coupling conditions: at 4℃- 25℃, pH: 4.5 -6 for 1.5 -24 h, Coupling could be done in organic solvents.
2. 偶聯(lián)方法
2.1用于偶聯(lián)的配體的制備
將蛋白質(zhì)或配體溶解在Coupling Solution中偶聯(lián)，pH：4.5-6。如果蛋白質(zhì)所在緩沖液干擾偶聯(lián)，則需脫鹽或透析進(jìn)行緩沖液交換至偶聯(lián)液。
2.2 用于偶聯(lián)的磁珠的制備
用蒸餾水（pH4.5-6）洗滌適量的磁珠五次，然后用0.5M的 NaCl（80ml溶液/ ml沉淀磁珠）洗滌磁珠。
2.3 配體與Magarose-COOH磁珠的偶聯(lián)
1) 以1：0.5至1：1的比例將配體溶液加入瓊脂糖磁珠中并輕輕混合以制備懸浮液。
2) 將EDC溶液加入懸浮液中至終濃度為0.1M。
3) 根據(jù)配體的類型，將懸浮液在4℃-RT下翻轉(zhuǎn)混合1.5-24小時(shí)。
注意：通常在低溫下耦合，則偶聯(lián)反應(yīng)時(shí)間需增加。
4) 在反應(yīng)的第一個(gè)小時(shí)期間用0.1M NaOH調(diào)節(jié)反應(yīng)混合物的pH。
注意：反應(yīng)的第一個(gè)小時(shí)內(nèi)pH值會(huì)降低。
5) 用含有0.5M NaCl的0.1M乙酸鹽緩沖液（pH4）洗滌磁珠，然后用含有0.5M NaCl的0.1M Tris-HCl緩沖液pH8洗滌。
6) 重復(fù)步驟5兩次。
7) 如果在偶聯(lián)中沒有使用有機(jī)溶劑，用5-10磁珠體積的蒸餾水洗滌磁珠。將樹脂儲(chǔ)存在2-8 ℃的20%乙醇中，加入0.02％疊氮化鈉。
注意：當(dāng)使用有機(jī)溶劑進(jìn)行偶聯(lián)時(shí)，用有機(jī)溶劑清洗磁珠，除去過量的配體，然后用蒸餾水清洗。
客戶發(fā)表相關(guān)論文：
1. Huanhuan Wang, et al. Screening and application of inhibitory aptamers for DNA repair protein apurinic/apyrimidinic endonuclease 1, International Journal of Biological Macromolecules, Volume 242, Part 3, 2023, 124918, https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2023.124918. (Magarose-COOH偶聯(lián)蛋白)
2. Jiang S, Lin Y, Zheng S. Development of the IMP biosensor for rapid and stable analysis of IMP concentrations in fermentation broth[J]. Biotechnology Journal, 2024, 19(6): 2400040. （瓊脂糖磁珠偶聯(lián)蛋白）
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