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MS-SAX001
1 ml
MS-SAX010
10 ml
1. 產(chǎn)品描述
MagStart-SAX（強(qiáng)陰離子交換劑）是一種專(zhuān)有磁性聚合物微粒，設(shè)計(jì)用于生物分子的分離、純化和回收，例如蛋白質(zhì)/肽、酶、抗體、DNA 或 RNA 。通過(guò)利用靜電荷的差異，這些生物分子通常表現(xiàn)帶負(fù)電荷，并容易且可逆地吸附到帶正電荷的MagStart-SAX微粒。
MagStart的技術(shù)有別于傳統(tǒng)的固相載體或微珠技術(shù)在于它是一種超多孔聚合物微粒，允許生物分子滲透和結(jié)合的網(wǎng)絡(luò)遍布整個(gè)微粒體積中，導(dǎo)致非凡的生物分子結(jié)合的能力。高官能團(tuán)密度允許多點(diǎn)連接和結(jié)合，從而實(shí)現(xiàn)靶生物分子的強(qiáng)離子結(jié)合。這一進(jìn)步將吸附容量轉(zhuǎn)化為數(shù)量級(jí)的改進(jìn)，性能優(yōu)于其他技術(shù)。MagStart-SAX 可替代MagReSyn?-SAX，非常適合1D 或 2D電泳、 HPLC或質(zhì)譜之前，復(fù)雜生物混合物的分餾（例如培養(yǎng)上清液、血清或血漿）。MagStart可快速磁分離（<10 秒），通過(guò)磁壓縮減少了洗滌和洗脫過(guò)程中顆粒間隙，從而提高了效率和回收率，強(qiáng)磁性還可防止微粒的意外丟棄而避免樣品損失。
Product Specifications
Description
Iron oxide-containing magnetic polymer microspheres
Application
Fractionation/purification of proteins, peptides, enzymes, antibodies, DNA, RNA
Matrix
Proprietary polymer
Core
Iron (II, III) oxide (Magnetite)
Functional group
Quaternary ammonium
Binding capacity
≥20 mg/ml (BSA)
Particle Size
~5–10 μm
Formulation
20 mg/ml suspension in 20% ethanol
Stability
pH 3.5~10, 4~60 ℃
Storage
Store at 4–8?C until expiry date on label DO NOT FREEZE
注意：不當(dāng)儲(chǔ)存、微粒干燥、細(xì)菌污染或離心回收可能導(dǎo)致容量/性能的不可逆損失。使用前應(yīng)充分混勻。
2. 結(jié)合流程
生物分子基于陰離子交換吸附結(jié)合分析中，結(jié)合緩沖液的離子強(qiáng)度要低，結(jié)合溶液的pH值應(yīng)至少高于目標(biāo)生物分子的等電點(diǎn) （pI）1單位。當(dāng) pH值高于 pI 時(shí)，生物分子將帶負(fù)電荷并將吸附到陰離子交換劑的陽(yáng)性基團(tuán)（季銨）上。
圖1. 三種不同生物分子的理論滴定曲線表明表面凈電荷的pH依賴(lài)性
注意：所有試劑都應(yīng)是新鮮制備的分析級(jí)，確保最佳性能。下面描述的緩沖溶液作為一個(gè)例子，并非限制。MagStart-SAX 與一系列不同的緩沖液兼容，用于結(jié)合/吸附和洗脫/解吸。
2.1. MagStart-SAX胺平衡
MagStart-SAX以 20 mg/ml懸浮于20% 乙醇液的形式提供。使用前需要去除運(yùn)輸溶液，并在結(jié)合緩沖液（例如 50 mM Tris，pH8.0）中平衡微粒。可根據(jù)推薦的方案按比例放大或縮小以滿(mǎn)足您的要求。當(dāng)前方案估計(jì)結(jié)合 ~1 mg 蛋白質(zhì)。
1）通過(guò)渦旋混合3秒將MagStart-SAX徹底重懸，以確保懸浮液均勻。
2）將 50 μl （1 mg） MagStart-SAX轉(zhuǎn)移到新離心管中。我們建議使用低結(jié)合試管。
3）磁分離，吸棄上清溶液。
4）在250 μl結(jié)合緩沖液中（50 mM Tris or triethanolamine, pH 8.0.）洗滌/平衡微粒1分鐘。
5）磁分離，吸出上清液。
6）重復(fù)步驟4）和5）兩次，總共洗滌三次。
7）去除緩沖液后，磁珠即可用于生物分子結(jié)合。
2.2. 蛋白質(zhì)結(jié)合流程
蛋白質(zhì)樣品制備后，建議通過(guò)0.2 μm過(guò)濾器過(guò)濾所有樣品或以10,000×g離心5分鐘，去除可能干擾生物分子結(jié)合的顆粒。
1）將含有最多 1 mg 總蛋白的蛋白質(zhì)樣品（在合適的結(jié)合緩沖液中）添加到平衡的 MagStart-SAX 中。用結(jié)合液將總反應(yīng)體積調(diào)節(jié)至至少250 μl，并通過(guò)移液或渦旋3秒充分混合。
注意：為確保結(jié)合，蛋白質(zhì)必須處于兼容的結(jié)合緩沖液中;可以使用PD-10色譜柱或類(lèi)似物將蛋白質(zhì)樣品緩沖液置換到合適的緩沖液中。
2）讓蛋白質(zhì)在室溫下與微粒結(jié)合5-10分鐘。連續(xù)混合以確保結(jié)合過(guò)程中樣品與微粒的良好互作。
3）將試管放在磁選機(jī)上，讓微粒清除。通過(guò)移液吸除上清。上清可以丟棄或用于蛋白質(zhì)定量。
4）加入至少250 μl結(jié)合緩沖液以洗滌微粒，并通過(guò)渦旋混合重懸3秒。
5）磁分離回收磁珠。在管子就位的情況下反轉(zhuǎn)磁鐵，清液沖洗卡在管蓋中的微粒以完全收集磁珠。
6）用移液管除去上清液。上清液可以丟棄或用于蛋白質(zhì)定量。
7）重復(fù)步驟4-6兩次，共洗滌三次。
2.3. 蛋白質(zhì)洗脫程序
吸附的蛋白質(zhì)/肽混合物可以通過(guò)緩沖液鹽濃度增加或pH值降低逐步洗脫進(jìn)行分餾。
2.3.1. 分餾：增加鹽濃度
1）將微粒與2.2吸附的蛋白質(zhì)/肽混合物重懸于50μl洗脫緩沖液（例如50mM Tris pH 8.0, 50mM NaCl）中，并在室溫下解吸2分鐘。
2）磁分離，用移液管吸出上清液。保留上清液用于蛋白質(zhì)定量或進(jìn)一步分析。
3）重復(fù)步驟1和2兩次，以提高分離蛋白的回收率?；旌系刃}濃度的洗脫液，用于進(jìn)一步分析。
4）使用鹽濃度增加的洗脫緩沖液（例如50 mM Tris pH 8.0，100、150、200或250 mM NaCl等）重復(fù)步驟1-3。注意：如需要，洗脫緩沖液的鹽濃度可增加到2M NaCl。
5）洗脫的樣品含有差異分餾的蛋白質(zhì)/肽。
2.3.2. 分餾：降低pH值
1）將微粒與2.2吸附的蛋白質(zhì)/肽混合物重懸于50μl洗脫緩沖液（例如50mM Tris，pH 7.5）中，并在室溫下解吸2分鐘。
3）重復(fù)步驟1和2兩次，以提高分離蛋白的回收率。混合等效pH值的池洗脫液用于進(jìn)一步分析。
4）使用pH值降低的洗脫緩沖液重復(fù)步驟1-3（例如，pH 7.0、pH 6.5等下為50 mM Tris）。洗脫的樣品現(xiàn)在含有原始蛋白質(zhì)/肽混合物的差異部分。
3. 常見(jiàn)問(wèn)題
問(wèn)題
可能原因
改善方法
蛋白質(zhì)未如預(yù)期那樣與微粒結(jié)合
弱離子相互作用
降低結(jié)合液的離子強(qiáng)度（鹽濃度）
不正確的結(jié)合pH
檢查和調(diào)整結(jié)合液pH，檢查電極校準(zhǔn)
蛋白質(zhì)降解
添加蛋白酶抑制劑
樣品或溶液中的干擾物阻止結(jié)合
將樣品脫鹽或透析到推薦的結(jié)合液中，以去除培養(yǎng)基成分/其他污染物
微粒數(shù)不足
增加顆粒的數(shù)量
蛋白質(zhì)含量過(guò)低
通過(guò)樣品濃度增加蛋白質(zhì)含量或制備更多起始材料
洗脫過(guò)程中蛋白回收率低
離子相互作用太強(qiáng)
增加洗脫緩沖液中的NaCl濃度
pH值太堿性
降低洗脫液pH值，以降低微粒和生物分子間的離子相互作用強(qiáng)度。
蛋白質(zhì)降解發(fā)生在純化過(guò)程中
在樣品和緩沖液中加蛋白酶抑制劑以防蛋白水解；使用新制的樣品和溶液；縮短制樣時(shí)間；盡量降低溫度。
蛋白在洗脫液中可能不穩(wěn)定或失活
確定目標(biāo)蛋白的最佳pH值和鹽穩(wěn)定性
蛋白質(zhì)分離不足
餾分之間的蛋白質(zhì)殘留
在餾分之間，包括每次 NaCl洗脫之間洗滌步驟，使用較低NaCl濃度增量增加
目標(biāo)蛋白凈電荷與污染蛋白相似
優(yōu)化樣品制備步驟；優(yōu)化洗脫液NaCl濃度和pH 值。
洗脫后靶蛋白失活
緩沖劑或鹽的干擾
通過(guò)分餾后透析、過(guò)濾、沉淀或體積排阻色譜除去鹽。
降低洗脫液濃度或在酸性緩沖液中洗脫，如檸檬酸鹽pH3–4；使用NaOH或合適緩沖液洗脫后立即增加pH值。
靶蛋白與下游應(yīng)用不相容
洗脫使用的 NaCl 或緩沖劑的干擾
通過(guò)透析、過(guò)濾、沉淀或尺寸排阻去除藥劑
應(yīng)用參考文獻(xiàn)：
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