I. 簡介
核苷酸、輔因子和糖蛋白是碳水化合物的代謝衍生物。在結構上，都具有順式-1,2-和1,3-二醇作為常見官能團。當置于合適pH的硼酸時，二醇轉化為穩(wěn)定的硼酸酯（如方案1）。將硼酸固定在載體上提供了一種有效的方法，用于從復雜混合物中分離多種含二醇的生物分子，從小分子到完整的糖蛋白和RNA。利用硼酸酯形成的可逆性，捕獲的化合物可以在溫和的條件下方便地回收用于進一步的應用或分析。固定化的硼酸與糖（如甘露糖，半乳糖，葡萄糖或核糖）上的鄰位順式 - 二醇基團結合。在結合和洗滌步驟之后，可以通過降低pH或通過添加山梨糖醇將含糖樣品從顆粒洗脫。同樣，固定化的硼酸與含有N-和O-連接寡糖的糖蛋白或糖肽反應，可以用于純化特定蛋白和多肽。基于磁珠固定化的硼酸PuriMag G-BA，因其突出的快速磁分離特性，為該過程提供了極大的方便，是分離含二醇的生物分子的有效工具。
純化方案1.硼酸與其相應的硼酸酯的解離平衡（pKa?9），它與順式二醇官能團反應形成的四方硼酸酯易水解?？赏ㄟ^方法1）降低pH解離或通過方法2）用山梨糖醇競爭替代釋放被捕獲的二醇。
II. 產品信息
產品名稱：PuriMag G-BA
平均尺寸：0.2 μm (+/- 0.02μm)；
濃度：10 mg/ml (w/v: 10 mg/ml in ddH2O, 0.05 % sodium azide)；
磁性顆粒含量（每克干固體）> 80％；
III. 緩沖液
? Wash & Binding buffer (W & B buffer): 0.25 M ammonium acetate, 50 mM MgCl2, pH 9.5.
? Elution buffer: 50 mM Tris, 0.1 M sorbitol, pH 8.5.
Note: Instead of Elution buffer, elution with 75% MeOH containing 50mM formic acid may be helpful.
IV. 產品儲存
本產品在2?8°C儲存后，在購買日期后至少可穩(wěn)定1年。將珠粒保存在封閉的小瓶中并保持直立狀態(tài)，以防止珠子干燥。不要凍結產品。使用前使用渦珠懸浮液。 PuriMag G-BA與質譜應用中常用的溶劑兼容。
V. 通用方案
以下通用方案描述了含有鄰位順式-二醇的分子與PuriMag G-BA的結合和洗脫操作流程。
1. 在2 ml微量離心管中加入100μl的PuriMag G-BA微球，加入1.0 ml 的W＆B緩沖液。將試管置于磁力分離器上，等待30秒鐘，以從上清液中分離珠粒。取出上清液并重復此步驟兩次。用0.5 ml 的W＆B緩沖液完全重懸微球。
2. 將樣品加入微球并用W＆B緩沖液填充至最大體積1ml。
3. 通過溫和混合（管旋轉器）在室溫下孵育15-30分鐘。
4. 將試管放在磁力分離器上，等待30秒鐘，將珠子從上清液中分離出來。
5. 加入1.5 ml的 W＆B緩沖液，充分懸浮，磁分離，棄上清液，重復洗滌兩次。
6. 加入100μl洗脫緩沖液，渦旋并在室溫下在熱混合器中孵育15分鐘或者中間搖動試管。
7. 將試管置于磁分離器上，等待30秒鐘，以從上清液中分離珠粒。將上清液轉移至新管中，即為純化后的產物。
引用本磁珠參考文獻：
1. Bin Luo, et al. Construction of a magnetic covalent organic framework with synergistic affinity strategy for enhanced glycopeptide enrichment, Journal of Materials Chemistry B, 07 Jul 2021, https://doi.org/10.1039/D1TB01168E
2. Yiting Luo, et al. Mesoporous materials for glycopeptide separation, TrAC Trends in Analytical Chemistry, Volume 167, 2023, 117234, https://doi.org/10.1016/j.trac.2023.117234. （Si-BA磁珠分離糖蛋白）
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