【產(chǎn)品介紹】
PuriMag NGSbead基于SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization)原理 ，配合精心優(yōu)化過的緩沖體系，用于二代測序文庫構(gòu)建過程中的DNA片段分選 、純化。 本產(chǎn)品可適用于各品牌DNA 、RNA建庫試劑盒，和目前廣泛使用的AMPure XP Beads使用方式相同，片段回收效率和文庫大小分布 均與 AMPure XP Beads高度吻合。
【保存方法及注意事項】
l 常溫運輸。 2-8℃保存 ，效期 一年 。避免冷凍避免冷凍 ！
l 磁珠使用前 須在室溫平衡至少30min。
l 80%乙醇需現(xiàn)用現(xiàn)配，否則將影響回收效率。
l 進行長度分選時，初始樣品體積需≥100μL，不足時請用超純水補齊。樣品體積太小，將導致移液誤差增大，進而影響分選的準確性 。
l 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
【文庫大小分選參考條件】
用PuriMag NGSbead構(gòu)建DNA文庫。經(jīng)過1×PuriMag NGSbead純化后，再按表1的條件進行分選，得到不同大小的文庫，用Agilent 2100 Bioanalyzer進行分析。
表1. 磁珠文庫分選推薦比例
插入片段平均長度（bp）
250
250-350
350-450
450-550
550-650
650-750
第一輪體積比
0.80×
0.70×
0.60×
0.55×
0.50×
0.45×
第二輪體積比
0.20×
0.15×
注意：1.8x bead：所有片段純化；1.0x bead ：Primers + small amplicons去除；0.65x – 0.25x bead片段分選。
【試劑盒組成】
組分
100次
保存
PuriMag NGSbead
5 ml
2-8℃
Wash buffer
80%乙醇（用戶自備）
常溫
Elution buffer
圖2. 磁珠法雙輪分選流程圖
【操作步驟】
1. 準備工作
將磁珠由冰箱中取出，室溫平衡至少30 min。配制80%乙醇。
2. 雙輪分選
1）請渦旋振蕩或充分顛倒磁珠以保證混勻 。
2）根據(jù)要求，參考表1向DNA溶液中加入第一輪分選磁珠，渦旋混勻或移液器吹打10次混勻。
3）室溫孵育5min。
4）將離心管短暫離心并置于磁力架中 ，待溶液澄清后（約 5min），小心轉(zhuǎn)移上清到干凈的離心管中 。
注意：轉(zhuǎn)移上清時，請勿吸取磁珠即使微量殘留都將影響后續(xù)文庫質(zhì)量。
5）參考表1向上清中加入第二輪分選磁珠 。
6）渦旋混勻或移液器吹打10次混勻，室溫靜置 5min。
7）將離心管置于磁力架中，待溶液澄清后（約 5min），小心移除上清 。
8）保持EP管始終處于磁力架中，加入 200μl新鮮配制的 80%乙醇漂洗磁珠，室溫孵育30 s，小心移除上清 。
9）重復步驟 8。
10） 保持離心管始終處于磁力架中，開蓋干燥磁珠至剛出現(xiàn)龜裂（約 5min）。
注意 ：切記磁珠不要干燥時間太久，磁珠干燥過度將影響純化效果。
11 ） 將離心管從磁力架中取出，加入適量ddH2O（≥20 μL），渦旋振蕩或使用移液器輕吹打充分混勻 。
12 ） 保持EP管始終處于磁力架中，小心吸取上清至干凈EP管中，即完成分選。
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