簡(jiǎn)介
PuriMag Si-X磁珠是涂有離子交換表面（X）的磁性硅納米顆粒。磁珠適用于：
● 質(zhì)譜分析（例如MALDI-TOF分析）和HPLC之前的樣品制備和預(yù)分級(jí)
● 用于多種下游應(yīng)用的蛋白質(zhì)和肽分離，例如酶測(cè)定
● 去除洗滌劑
● 臨床樣本的分級(jí)，例如血清，血漿，組織，腦脊液，尿液和細(xì)胞裂解液
PuriMag Si-X磁珠可方便用于手動(dòng)和自動(dòng)化工作流程。在外磁場(chǎng)作用下，高磁強(qiáng)度的磁珠通常在1分鐘內(nèi)完全收集?？焖俸屯耆蛛x導(dǎo)致非常好的再現(xiàn)性，因?yàn)樵谙礈觳襟E不會(huì)損失磁珠。此外，與基于柱子的離子交換色譜相比，蛋白質(zhì)吸附、解吸和磁性收集的短暫孵育時(shí)間通常顯著縮短，如HPLC。PuriMag Si-X磁珠適用于自動(dòng)液體處理平臺(tái)上的96孔微孔板。
產(chǎn)品名稱
PuriMag Si-X
濃度
10mg / ml
平均尺寸
0.3~0.4μm
材料
硅基磁性材料
磁分離
<30 S
儲(chǔ)存
無(wú)水乙醇中（2-8℃）
II．產(chǎn)品
本公司硅基離子交換磁珠產(chǎn)品主要包括強(qiáng)陽(yáng)離子（SCX）、強(qiáng)陰離子（SAX）、弱陽(yáng)離子（WCX）、弱陰離子（WAX）、PSA、DEAE六種，其基本特性如下表：
>40 μg protein / mg of Beads
Name: PuriMag-Si-PSA
Cat: PMPro013
Name: PuriMag-Si-WCX
Cat: PMPro009
Name: PuriMag-Si-WAX
Cat: PMPro008
Name: PuriMag-Si-SCX
Cat: PMPro015
Name: PuriMag-Si-SAX
Cat: PMPro014
Name: PuriMag-Si-DEAE
Cat: PMPro016
注意：設(shè)計(jì)用于蛋白質(zhì)純化的通用方案非常困難。 以下方案是用于部分蛋白質(zhì)和/或肽與 PuriMag Si-X 磁珠混合的示例。 用戶可以使用替代的結(jié)合、洗滌和洗脫緩沖液。 為了獲得最佳結(jié)果，用戶可根據(jù)故障排除部分的描述來(lái)確定最佳工作條件。 我們建議進(jìn)行條件優(yōu)化用于每個(gè)單獨(dú)應(yīng)用的磁珠數(shù)量。 洗脫體積可相應(yīng)調(diào)整以避免不必要的樣品稀釋。
A. 選擇合適的離子交換磁珠
帶電荷的蛋白質(zhì)和/或肽將與帶相反電荷的基質(zhì)結(jié)合。
如果目標(biāo)蛋白和/或肽的 pI（等電點(diǎn)）低于緩沖液的 pH 值，則選擇陰離子交換磁珠（DEAE 、PSA、WAX（弱陰離子交換）和 SAX (強(qiáng)陰離子交換）磁珠）。 如果目標(biāo)蛋白和/或肽的 pI 高于緩沖液的 pH 值，則應(yīng)選擇陽(yáng)離子交換磁珠，例如 WCX（弱陽(yáng)離子交換）磁珠和 SCX（強(qiáng)陽(yáng)離子交換）磁珠。
B. 選擇合適的緩沖液
結(jié)合/洗滌緩沖液：結(jié)合/洗滌緩沖液的 pH 值應(yīng)與目標(biāo)蛋白或肽的 pI 至少相差一個(gè) pH 單位。
洗脫緩沖液：為了從磁珠上洗脫目標(biāo)蛋白或肽，用戶應(yīng)通過(guò)逐步洗脫優(yōu)化洗脫條件，使用鹽濃度增加的溶液或改變洗脫緩沖液的 pH。
III．對(duì)應(yīng)緩沖體系
肽/蛋白質(zhì)與PuriMag Si-X磁珠表面上的離子基團(tuán)結(jié)合，同時(shí)洗去雜質(zhì)。在解吸緩沖液中洗脫后，純化的肽和蛋白質(zhì)可供下游使用。
1）弱陽(yáng)離子交換磁珠PuriMag Si-WCX對(duì)應(yīng)緩沖液
● 預(yù)平衡溶液：0.05 M Ammonium Acetate（AmAc）， pH 4，1M NaCl
● 吸附緩沖溶液：0.05 M Ammonium Acetate， pH 4
● 洗滌液：水（HPLC級(jí)）
● MALDI MS的解吸溶液1： 1% TFA水溶液
解吸溶液2： a) 0.05 M AmAc，pH 4，0.2 M NaCl
b) 0.05 M AmAc，pH 4，0.4 M NaCl
c) 0.05 M AmAc，pH 4，0.6 M NaCl
d) 0.05 M AmAc，pH 4，0.8 M NaCl
e) 0.05 M AmAc，pH 4，1 M NaCl
對(duì)于緩沖系統(tǒng)，應(yīng)考慮目標(biāo)分子的pI。為有效吸附和解吸，吸附和解吸緩沖液的pH應(yīng)至少比要結(jié)合的分子的pI低1個(gè)pH單位，但不應(yīng)超過(guò)4個(gè)pH單位。
為分析體液如血清，建議在不同pH下測(cè)試其它緩沖系統(tǒng)，因?yàn)槟繕?biāo)分子的pI是未知的?？蛇x吸附緩沖液：
● 50 mM Sodium citrate, pH 5 (with increasing NaCl concentrations as for the AmAc system)
● 50 mM MES, pH 6
● 50 mM sodium phosphate pH
● 50 mM HEPES pH 8
為了更好地處理，可使用0.01%吐溫20或0.01%TX100的洗滌劑。但請(qǐng)注意，清潔劑可能會(huì)干擾質(zhì)譜等下游應(yīng)用。推薦使用高達(dá)8mM的正辛基葡糖苷（n-octylglucoside）進(jìn)行血清分析。
2）弱陰離子交換磁珠PuriMag Si-WAX對(duì)應(yīng)緩沖液
● 預(yù)平衡溶液： 0.02 M bis Tris，pH 6，1M NaCl
● 吸附溶液：0.02 M bis Tris，pH 6
解吸溶液2： a）0.02 M bis Tris，pH 6，0.05 M NaCl
b）0.02M bis Tris，pH6，0.1M NaCl
c）0.02M bis Tris，pH6，0.15M NaCl
d）0.02 M bis Tris，pH 6，0.20 M NaCl
e）0.02M bis Tris，pH6，0.25M NaCl
為分析體液如血清，建議在不同pH下測(cè)試其它緩沖系統(tǒng)，因?yàn)槟繕?biāo)分子的pI是未知的。可選吸附緩沖液：
● 0.1%TFA（pH <3.0）
● 檸檬酸鈉緩沖液，pH 3.5-4.5
● N-甲基哌嗪，20mM，pH 4.5-5.0
● 哌嗪，20 mM，pH 5.0-6.0
● bis Tris，20 mM，pH 5.8-6.4
● 雙Tris丙烷，20 mM，pH 6.4-7.3
● 三乙醇胺，20mM，pH 7.3-7.7
對(duì)于解吸溶液（鹽梯度洗脫），須加入0.05M、0.1M、0.15M、0.2M和0.25M NaCl，如上面的Tris緩沖液。
3）強(qiáng)陽(yáng)離子交換磁珠PuriMag Si-SCX對(duì)應(yīng)緩沖液
● 預(yù)平衡溶液：50 mM Sodium acetate, pH 5.0, 1M NaCl
● 吸附溶液：50 mM Sodium acetate, pH 5.0, 20 mM NaCl
解吸溶液2： 50 mM Sodium phosphate, pH 8.0, 0.05-1.0 M NaCl
或改變洗脫液pH (如 50 mM lactic acid buffer pH followed by 4.0, then 50 mM acetic acid pH 5.0 , then 50 mM MES pH 6.0, then 50 mM sodium phosphate buffer pH 7.0, then 50 mM HEPES pH 8.0, and then 20 mM ammonium acetate pH 9.5).
4）強(qiáng)陰離子交換磁珠PuriMag Si- PSA、DEAE、SAX對(duì)應(yīng)緩沖液
● 預(yù)平衡溶液：50 mM Sodium phosphate pH 8.0, 1M NaCl
● 吸附溶液：50 mM Sodium phosphate pH 8.0, 20 mM NaCl
解吸溶液2： 50 mM Sodium phosphate pH 8.0, 0.1-1.0 M NaCl
或改變洗脫液pH (如 20 mM bis-Tris pH 7.0, followed by 20 mM, followed by 20 mM L-Histidine pH 6.0, then 20 mM Piperazine pH 5.0 and 50 mM Sodium Citrate buffer pH 4.0);
IV. 實(shí)驗(yàn)使用流程
1）預(yù)平衡磁珠：渦旋PuriMag Si-X磁珠均勻懸浮，將10μl磁珠懸浮液轉(zhuǎn)移至PCR管，磁分離去除上清。從磁鐵上取下管子，加入50μl預(yù)平衡溶液并重新懸浮，磁分離棄上清，重復(fù)洗滌兩次。
2）吸附緩沖液平衡磁珠：向磁珠中加入50μl吸附緩沖液，并重新懸浮磁珠，磁分離棄上清。吸附緩沖液重復(fù)洗滌兩次。
3）蛋白質(zhì)/肽的吸附：向洗滌過(guò)的磁珠中加入含大約2μg蛋白質(zhì)或肽的樣品，吸附溶液總體積20μl。在室溫下輕輕搖動(dòng)磁珠5分鐘完成吸附，磁分離棄上清。加入20μl吸附液，洗滌磁珠，棄去上清液。重復(fù)洗滌三次。
4）解吸：
A）MS分析的解吸：向磁珠中加入50μl洗滌液并重懸（脫鹽步驟），磁分離，棄上清液。向磁珠中加入10μl解吸附溶液1，重新懸浮，磁分離，取出液體至Eppendorf管進(jìn)行進(jìn)一步分析。
MALDI分析：通常，將1μl洗脫液和1μl適當(dāng)MALDI-MS基質(zhì)的飽和溶液混合（typically, alphacyano-4-hydroxy-cinnamic acid is used for peptides 4000 Da, sinapinic acid is used.）。在MALDI靶上點(diǎn)樣1μl混合物產(chǎn)生可靠的光譜。
B） 在天然蛋白質(zhì)條件下的解吸：將磁珠重新懸浮在10μl解吸附溶液2a （0.05M AmAc, pH 4, 0.2 M NaCl）中。并在室溫下孵育2分鐘，磁分離并轉(zhuǎn)移上清液。增加解吸溶液2的鹽濃度b-e，該解析步。
5）4B步驟后的脫鹽：如果在天然條件下解吸后需脫鹽（4B），例如，對(duì)于質(zhì)譜分析，推薦PuriMag的蛋白質(zhì)組學(xué)C3、C8或C18磁珠。
本產(chǎn)品僅供科研使用!
客戶論文：
1. 杜建森,李西峰,田曉青,等.不同修飾納米磁珠對(duì)病原菌快速富集的效果評(píng)價(jià)[J].中國(guó)國(guó)境衛(wèi)生檢疫雜志,2024,47(06):551-554.DOI:10.16408/j.1004-9770.2024.06.001. PuriMag Si-X磁珠富集細(xì)菌
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