【產(chǎn)品介紹】
瓊脂糖凝膠電泳是一種用于分離純化DNA片段的重要分子生物學實驗技術。磁珠法DNA膠回收試劑盒是普睿邁格生物科技有限公司最新研制的一種DNA膠回收試劑盒。本試劑盒中的試劑盒采用了獨特的緩沖液溶解由TAE或TBE電泳緩沖液制備的瓊脂糖凝膠塊，從凝膠塊中溶解的DNA片段可以特異性地吸附到硅基化磁珠的表面，在磁場的作用下，攜帶DNA的磁珠向磁鐵方法進行定向移動和聚集，與剩余的其它雜質完全分開。通過簡單的兩次洗滌，可以將雜質完全洗盡。最后用水或低鹽緩沖液將結合在磁珠上的DNA洗脫下來，洗脫下來的 DNA片段純度高，完整性好，可直接用于連接反應、PCR 擴增、DNA測序等各種分子生物學實驗。本試劑盒可以采用手工操作進行，也可以經(jīng)對自動化提取設備進行參數(shù)調試后，用于自動化或半自動化的工作平臺。
【特點】
l 磁珠之間吸附量差異極小，可重復性好。
l 可選擇手動或自動操作方式。
l 操作簡單，無需離心或過濾等耗時操作。
l 可實現(xiàn)高通量
【保存方法及注意事項】
請將試劑盒中的PuriMag Beads置于2-8℃保存，其余試劑室溫保存，有效期詳見包裝。
l 嚴禁冰凍、離心。冰凍、離心可能會對磁珠造成不可逆的損害。
l 磁珠長期放置后會聚集成團，從而使磁珠表面積減小，降低樣品回收得率，使用前一定要渦旋振蕩徹底混勻磁珠（通常需渦旋振蕩20秒）。
【試劑盒組成】
組分
100次
保存
MG Buffer
30 ml
常溫
Wash buffer
75%乙醇（用戶自備）
Elution buffer
5 ml
PuriMag bead
2 ml
2-8℃
異丙醇
用戶自備
DNA濃度及純度檢測 ：（1）得到的基因組DNA片段大小與樣品保存時間、操作過程中剪切力等因素有關，所得DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度和純度。 （2）DNA應在OD260處有顯著吸收峰，OD260=1相當于大約50ng/ul雙鏈DNA，40ng/ul單鏈DNA。OD260/OD280比值應為1.7~1.9，如果洗脫時使用去離子水，比值會偏低，因為pH和離子會影響吸光度，并不表示純度低。
【操作步驟】
切膠→
1) 長波紫外燈照射下快速從瓊脂糖凝膠中切下目的條帶（盡量去除多余瓊脂糖膠），稱重后，將其放入干凈的1.5 ml離心管中。
溶膠→
2) 向膠塊中加入1:1體積的MG buffer（體積：重量）（比如，100 mg的凝膠中加入100 μl的MG buffer。注：對于濃度大于2％的瓊脂糖凝膠，向膠塊中加入2:1體積的MG buffer）。將凝膠混合物在65 ℃條件下放置10 min，間或混勻直至膠塊完全溶解。
結合→
3) 向離心管中加入20 μl PuriMag beads（磁珠搖勻后加入），移液槍吹打混勻后室溫靜置3 min，再吹打混勻1次，靜置3 min。磁分離20 s，吸棄上清。
清洗→
4) 向離心管中再加入步驟2同樣體積的MG buffer，移液槍吹打混勻后室溫靜置3 min，于磁力架上磁分離20 s，吸棄上清。
5) 向離心管中加入700 ul Wash buffer，移液槍吹打混勻后室溫靜置2 min左右，置于磁力架上磁分離20 s，吸棄上清。重復該步驟一次。倒置離心管2-3 min，室溫晾干5 min，讓殘留乙醇揮發(fā)干凈，以免影響后續(xù)實驗。
洗脫→
6) 向離心管中加入10-50 ul Elution buffer（Elution buffer在65-70 ℃中預熱后洗脫效果更好，減小洗脫體積或多次洗脫可增大DNA濃度），移液槍吹打混勻1-2 min，于磁力架上磁分離20 s，小心吸走上清液放入新離心管中，即為提取的質粒DNA，可存放于2-8 ℃，長期存放需放置于-20 ℃。
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