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貨號
規(guī)格
MS-STV001
1 ml
MS-STV010
10 ml
1. 產(chǎn)品描述
MagStart-Streptavidin磁珠是一種專有的磁性聚合物微粒，為分離或固定包括生物素化生物分子提供了一種簡單方便的方法。MagStart-Streptavidin磁珠經(jīng)特殊處理，使其抵抗trypsin和LysC蛋白酶水解能力提高100倍，避免了基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)研究中鏈霉親和素酶解肽的污染，從而減少了樣品處理和MS分析時間，提高整體靈敏度并增加采樣深度。MagStart磁珠是一種超多孔聚合物網(wǎng)絡(luò)，允許分子在整個微粒內(nèi)滲透和結(jié)合，因而具高容量結(jié)合目標(biāo)生物素化生物分子的能力。該產(chǎn)品由磁微粒共價連接重組SA（~55 kDa）組成。高密度官能團可極大增加生物分子負(fù)載量，提高穩(wěn)定性并降低SA浸出的可能性。MagStart-Streptavidin為生物素化寡核苷酸和蛋白質(zhì)提供了無與倫比的能力。該產(chǎn)品應(yīng)用包括生物素化核酸和蛋白的分離、細(xì)胞分離、DNA/RNA 結(jié)合蛋白的分離和免疫測定。與MagReSyn? Streptavidin MS有等同效果。
（抗trypsin和LysC蛋白酶水解能力提高100倍）
Product Specifications
Description
Iron oxide-containing magnetic polymer microspheres
Application
Isolation and purification of biotinylated biomolecule
Matrix
Proprietary polymer
Core
Iron (II, III) oxide (Magnetite)
Functional group
Streptavidin (55 kDa)
Binding capacity
≥3,000 pmoles/mg biotinylated oligonucleotide (24 mer), ≥300 μg/mg biotinylated IgG
Particle Size
~5–10 μm
Formulation
10 mg/ml in 80 mM Phosphate, pH 7.5, 150 mM NaCl, 1.5 mM EDTA, 0.05% Tween? 20, 0.02% sodium azide (NaN3)
Stability
pH 3~10, 4~60 ℃
Storage
Store at 4–8?C until expiry date on label DO NOT FREEZE
注意：不當(dāng)儲存、微粒干燥、細(xì)菌污染或離心回收可能導(dǎo)致容量/性能的不可逆損失。使用前應(yīng)充分混勻。
MagStart-Streptavidin微粒極高的官能團密度為生物分子偶聯(lián)提供了高濃度反應(yīng)位點。MagStart-Streptavidin高結(jié)合載量允許減少高活性功能微粒的體積來實現(xiàn)實驗方案小型化，進(jìn)而最大限度地減少所需試劑的體積，從而允許以更小的體積應(yīng)用固定化配體。MagStart可快速磁分離（<10 秒），通過磁壓縮減少了洗滌和洗脫過程中顆粒間隙，從而提高了效率和回收率，強磁性還可防止微粒的意外丟棄而避免樣品損失。
2. 結(jié)合和洗脫流程
影響生物素化生物分子結(jié)合的因素包括緩沖液成分、pH 值以及污染物/干擾化合物的存在。雖然大分子和小分子都可固定，但生物素化分子的大小可能會影響整體結(jié)合能力。因此，可能需要根據(jù)您的應(yīng)用優(yōu)化所需的磁珠數(shù)量。如果磁珠中的生物素化分子達(dá)到飽和，則下游應(yīng)用可獲得最佳效果。生物素化分子的結(jié)合效率可通過比較偶聯(lián)反應(yīng)前后溶液中的分子濃度來確定。MagStart-Streptavidin磁珠與各種常用緩沖液兼容，包括 Tris、Phosphate 和 SSC（sodium saline citrate）。
注意：所有試劑均應(yīng)新鮮配制并達(dá)到分析級，以確保最佳性能。下文所述的程序、方法和緩沖溶液僅作示例，并非限制。MagStart-Streptavidin與一系列常用于捕獲和/或固定生物素化分子的緩沖液兼容?？蛇_(dá)到的純度和產(chǎn)量取決于配體，應(yīng)優(yōu)化實驗條件以確保獲得理想的結(jié)果。
質(zhì)譜兼容性說明：如果要對富集的目標(biāo)物進(jìn)行進(jìn)一步的質(zhì)譜分析，請考慮在初始洗滌步驟后使用其他不含去垢劑的緩沖液，以去除可能干擾質(zhì)譜分析的殘留去垢劑。這可能包括使用不含洗滌劑的初始緩沖液，然后再用揮發(fā)性無鹽緩沖液（如碳酸氫銨、甲酸銨、碳酸氫銨三乙酯）洗滌。
2.1. MagStart-Streptavidin磁珠的平衡
磁珠以10 mg/ml懸浮液（80 mM Phosphate, pH 7.5, 150 mM NaCl, 1.5 mM EDTA, 0.05% Tween? 20, 0.02% sodium azide (NaN3)）形式供應(yīng)。使用前，需去除運輸溶液，并將微顆粒在結(jié)合緩沖液（e.g. 80 mM sodium phosphate, pH 7.4–8.0, 150 mM NaCl, 0.05% Tween? 20）中平衡。 按以下步驟平衡 MagStart-Streptavidin 的等分磁珠，以滿足您的要求。每個反應(yīng)至少需要 10 μl 微顆粒懸浮液，以確保有合適的磁珠量，便于吸入緩沖液。
1) 通過渦旋攪拌或倒置徹底重懸磁珠。
2) 將至少 10 μl 磁珠轉(zhuǎn)移到一個新的離心管中。
3) 將離心管放在磁分離器上至澄清。
4) 用移液管吸出運輸溶液。
5) 用 200 μl 結(jié)合緩沖液洗滌/平衡磁珠。
6) 將離心管放在磁分離器上至澄清。
7) 用移液管吸出結(jié)合緩沖液，重復(fù)步驟 5 和 6 兩次，共清洗三次。
8) 去除步驟 5 中的結(jié)合緩沖液后，MagStart-Streptavidin磁珠即可用于結(jié)合生物素化分子。
2.2. 生物素化寡核苷酸的固定化
1） 計算應(yīng)用所需的MagStart鏈霉親和素磁珠的量，并轉(zhuǎn)移到干凈的離心管中。
2） 例如，10μl鏈霉親和素磁珠（100μg）足以結(jié)合≥300 pmol的生物素化寡核苷酸（24 mer）。
3） 將生物素化寡核苷酸添加到2.1中平衡的鏈霉親和素磁珠中。將總反應(yīng)體積調(diào)整至至少100μl與結(jié)合緩沖液混合，并連續(xù)充分混合離心管。
4） 使生物素化寡核苷酸在室溫下與磁珠結(jié)合15-30分鐘。
5） 將離心管放在磁分離器上至澄清。
6） 用移液管吸取偶聯(lián)上清液。上清液可丟棄或通過差異來量化磁珠上結(jié)合的生物素化寡核苷酸量。
7） 通過分別用3×200μl結(jié)合緩沖液洗滌磁珠，從磁珠中去除任何未結(jié)合的寡核苷酸。
8） 每次清洗后，將離心管放在磁力架上至澄清。
9） 用移液管移走上清液。
10）可以丟棄來自洗滌步驟的上清液或?qū)⑵渑c偶聯(lián)上清液合并用于定量。
2.3. 生物素化蛋白質(zhì)的固定化
1） 計算固定感興趣的蛋白質(zhì)所需的鏈霉親和素磁珠的量。如10μl 磁珠（100μg）足以結(jié)合約≥30μg生物素化IgG。
2） 將生物素化蛋白添加到2.1中平衡的磁珠中。用結(jié)合緩沖液將總反應(yīng)體積調(diào)節(jié)至至少100μl，并連續(xù)充分混合。
3） 使生物素化的蛋白質(zhì)在室溫下與磁珠結(jié)合15-30分鐘。
4） 將離心管放在磁分離器上至澄清。
5） 用移液管除去偶聯(lián)上清液。上清液可丟棄或通過差異來量化結(jié)合在磁珠上的生物素化蛋白的量。
6） 用3 × 200μl結(jié)合緩沖液洗滌，從磁珠中去除任何未結(jié)合的蛋白質(zhì)。
7） 將離心管放在磁分離器上至澄清。
8） 用移液管吸取上清液。
9） 洗滌步驟的上清液可以丟棄或與偶聯(lián)上清液合并在一起進(jìn)行定量。
3. 試劑適應(yīng)性
MagStart-Streptavidin 磁珠相容組成如下:
Reagent
Concentration
Tween? 20
≤1%
Tris, Saline Sodium Citrate (SSC), Sodium phosphate
≤100 mM
NaCl
≤2 M
4. 常見問題
問題
可能原因
改善方法
生物素化的生物分子不會像預(yù)期的那樣與磁珠結(jié)合
反應(yīng)時間不足
將反應(yīng)時間擴充到至少15-30分鐘
不正確的結(jié)合pH
檢查和調(diào)整結(jié)合液pH7.5-8.0
樣品或溶液中的干擾物阻止結(jié)合
將樣品脫鹽或透析到推薦的結(jié)合液中，以去除培養(yǎng)基成分/其他污染物
微粒數(shù)不足
增加顆粒的數(shù)量
生物分子濃度過低
增加生物素化分子濃度
生物素化不夠
考慮目標(biāo)分子未正確生物素化
生物分子的非特異吸附
離子或靜電作用導(dǎo)致的非特異吸附
增加結(jié)合、洗滌、洗脫緩沖液中的NaCl濃度；增加結(jié)合洗滌液中吐溫20濃度
洗滌不充分
增加洗滌次數(shù)、洗滌液體積和平衡時間
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