1. 概述
直鏈淀粉磁珠（PuriMag Si-Amylose）是通過將Amylose共價偶聯(lián)到納米超順磁珠表面，并可在較寬pH范圍內(nèi)穩(wěn)定不泄漏。PuriMag Si-Amylose 磁珠具有快速磁響應(yīng)性、高蛋白結(jié)合能力和低非特異性吸附，可快速有效地從細胞培養(yǎng)上清中純化MBP（麥芽糖結(jié)合蛋白）融合蛋白。將珠子簡單地加入到細胞培養(yǎng)物上清液中， MBP融合蛋白質(zhì)將與珠子結(jié)合。在洗去未結(jié)合的雜蛋白后，MBP融合蛋白可從磁珠上洗脫下來?；蛘呓Y(jié)合蛋白質(zhì)的磁珠也可直接用于下游pull down實驗。該過程可手動完成或完全自動化以實現(xiàn)高通量應(yīng)用。
2. 產(chǎn)品規(guī)格
? 直徑：400 nm
? pH穩(wěn)定性：pH 3-13
? 磁響應(yīng)率：50?70 emu / g
? 儲存溶劑：20％乙醇
? 結(jié)合能力：10μgMBP5 * - 肌球蛋白ΔSal融合蛋白/ mg磁性
? 珠子濃度：10 mg/ml
? 儲存：2-8 ℃，2年
3. 純化蛋白方案
以下方案供使用PuriMag Si-Amylose磁珠純化MBP融合蛋白的一般流程，用戶可根據(jù)具體應(yīng)用對其進行修改。
A. 使用材料
1. 結(jié)合/洗滌緩沖液：20mM Tris-HCl，0.2M NaCl，1mM EDTA，1mM DTT，pH7.4
2. 洗脫緩沖液：10mM 麥芽糖（溶解在結(jié)合/洗滌緩沖液）
3. 磁性支架或96孔磁珠自動化處理器
B. 分離MBP融合蛋白
1. 使用前，徹底混勻磁珠。
2. 將100μl磁珠（1mg）置于1.5ml無菌微量離心管中。
3. 將試管置于磁力架上，收集磁珠并丟棄上清液。
4. 使用結(jié)合/洗滌緩沖液（每次500μl）洗滌磁珠兩次，收集磁珠并丟棄上清液。
5. 將200-500μl細胞培養(yǎng)上清液加入磁珠中，充分混合在4℃旋轉(zhuǎn)器上孵育1.0小時。
6. 如需要，用磁鐵收集珠子并保存上清液進行分析。
7. 用結(jié)合/洗滌緩沖液（每次500μl）洗滌磁珠三次，去除非特異吸附雜蛋白。
8. 結(jié)合蛋白的磁珠可直接用于下游pulld own實驗?；蛘邔BP融合蛋白從磁珠上洗脫下來。將磁珠懸浮在50μl洗脫緩沖液中，在4℃旋轉(zhuǎn)器上孵育10分鐘。磁分離后，將上清液轉(zhuǎn)移到干凈的微量離心管中。如需要，重復此步驟一次。合并來自多次洗脫的洗脫液。純化的蛋白即可使用。
磁珠客戶發(fā)表論文：
1. Huang, J., Yang, L., Yang, L. et al. Stigma receptors control intraspecies and interspecies barriers in Brassicaceae. Nature 614, 303–308 (2023). https://doi.org/10.1038/s41586-022-05640-x （Si-Amylose磁珠釣取蛋白）
2. Zhang X, Wang G, Zhang P, et al. Plant cell-cycle regulators control the nuclear environment for viral pathogenesis[J]. Cell Host & Microbe, 2025. （Si-Amylose磁珠釣取蛋白）
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